Optimización de la técnica RAPD para identificar cv de olivo

Entre las técnicas moleculares, RAPD-PCR es una de las más rápidas y operativamente simple para la caracterización de cultivares. Sin embargo, la confiabilidad de sus resultados radica, en gran parte, en la optimización previa de variables que pueden afectar los patrones de amplificación. Se investigó la repetibilidad de patrones RAPD de olivo bajo diferentes condiciones experimentales. Entre ellas, la pureza del ADN, el tipo de Taq ADN-polimerasa, las concentraciones de Mg+2 y dNTPs, el uso de tejidos atacados por patógenos y el uso de diferentes termocicladores, modificaron los patrones de bandas. Por el contrario, pequeñas modificaciones de la temperatura de apareamiento de cebadores, la concentración del ADN molde y la edad de los tejidos vegetales de los cuales se aisló ADN, no afectaron los patrones amplificados.

RAPD-PCR, although a relatively fast and simple technique for cultivar characterization, is influenced by several parameters that need to be optimized prior using it as a routine identification methodology. The repeatability of olive RAPD patterns was investigated under different PCR conditions. Among the conditions tested the quality of the DNA, the Taq DNA polymerase source, changes in Mg2+ and dNTPs concentration, pathogen infestation of olive tissues and different thermocyclers could alter the RAPD patterns. In contrast, small changes in the temperature of annealing, the DNA concentration and the age of tissues from which DNA is isolated did not affect the amplification patterns.

Fil: Cavagnaro, Pablo. Universidad Nacional de Cuyo. Facultad de Ciencias Agrarias. Departamento de Ciencias Biológicas

Fil: Masuelli, Ricardo W.. Universidad Nacional de Cuyo. Facultad de Ciencias Agrarias. Departamento de Ciencias Biológicas