Entwicklung einer PCR zum Nachweis der EAV-Infektion

The goal of this work was the development of suitable (real-time) RT-PCR techniques for fast and sensitive diagnosis of EAV and for molecular-epidemiological characterisation of viral strains, as an alternative to virus isolation. To this purpose two conventional RT-PCR methods and one real-time RT-PCR were adapted to detect the broadest possible spectrum of viral strains. Several dilutions with Bucyrus strain showed a 100-fold higher sensitivity of real-time RT-PCR and heminested RT-PCR compared to simple RT-PCR. Making use of 11 cell culture supernatants of different EAV isolates and 7 semen samples of positive stallions, the suitability of the techniques could be shown. Phylogenetic analysis of sequences of the newly analysed samples compared with known sequences indicated that more EAV-lineages exist than presently described.

Ziel dieser Arbeit war, als Alternative zur Isolation geeignete (real-time) RT-PCR Methoden für die schnelle Diagnose von EAV und zur molekular-epidemiologischen Charakterisierung von Virusstämmen zu entwickeln. Hierfür wurden zwei konventionelle RT-PCR Methoden und eine real-time RT-PCR so adaptiert, dass ein möglichst breites Spektrum von Isolaten nachweisbar sein sollte. Verdünnungsreihen mit dem Bucyrus-Stamm zeigten eine hundertfach höhere Sensitivität der real-time- und der heminested RT-PCR im Vergleich zu der einfachen RT-PCR. Die Eignung der Methoden konnte mittels 11 Zellkulturüberständen verschiedener EAV-Isolate und 7 EAV-positiven Spermaproben gezeigt werden. Die phylogenetische Analyse der Sequenzen der eigenen Proben mit bekannten Sequenzen ergab Hinweise auf mehr EAV-Subgruppen als bisher beschrieben.