Produção de biofilme, perfil de sensibilidade e aspectos epidemiológicos de espécies fúngicas e algas do gênero Prototheca isoladas de casos de mastite bovina

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Processo FAPESP: 2014/ 03437-3

Pós-graduação em Biologia Geral e Aplicada - IBB

Apesar de as bactérias serem os agentes mais prevalentes na mastite bovina, cada vez mais a literatura registra casos da doença ocasionados por fungos e algas do gênero Prototheca. O presente trabalho teve como objetivo gerar novos conhecimentos sobre a etiologia e patogenicidade dos agentes da mastite bovina causada por fungos e algas do gênero Prototheca a partir da identificação morfofisiológica e molecular, além de análises da capacidade de produção de biofilme e perfil de sensibilidade. Para isto, foram realizadas análises morfofisiológicas e moleculares de 33 isolados de leveduras e 40 algas do gênero Prototheca obtidos a partir de casos clínicos e subclínicos de mastite, colhidos sistematicamente em cinco propriedades leiteiras dos estados de São Paulo e Minas Gerais, como parte de seus respectivos programas de controle de mastite. Os resultados obtidos indicaram que todas as algas são pertencentes à espécie Prototheca zopfii e, entre as leveduras, foram identificadas as seguintes espécies: Pichia kudriazevii (n=16; 48,5%), Candida akabanensis (n=8; 24,2%), Candida tropicalis (n=3; 9,1%), Cyberlindnera jadinii (n=2; 6,1%), Candida glabrata (n=1; 3%), Candida parapsilosis (n=1; 3%), Candida palmioleophila (n=1; 3%) e Candida haemulonis (n=1; 3%), sendo que Candida akabanensis, Candida palmioleophila e Cyberlindnera jadinii nunca foram descritas em casos de mastite bovina. A diversidade de espécies de leveduras isoladas sugere que a utilização de técnicas moleculares tem permitido a realização de diagnósticos mais precisos, os quais não eram possíveis a partir das metodologias convencionais de identificação. Quanto à capacidade de produção de biofilme, os resultados demonstraram que tanto leveduras quanto Prototheca zopfii possuem esta habilidade, sendo este um fator de virulência importante para a persistência destes micro-organismos no ambiente de ordenha. A análise do perfil de sensibilidade dos isolados foi realizada com a utilização do antifúngico fluconazol. Todos os isolados da espécie P. zopfii mostraram-se resistentes à droga, enquanto que, para as leveduras, foram observados os três padrões de sensibilidade: sensível (n=6; 21,43%), sensibilidade dose-dependente (n= 21;75%) e resistente (n=1; 3,57%). Na análise epidemiológica realizada para uma das propriedades do estudo, verificou-se que não houve diferença estatística entre leveduras e Prototheca zopfii em relação às variáveis consideradas. Diante dos resultados, foi possível constatar a relevância destes micro-organismos em casos de mastite bovina e a importância de estudos para a identificação correta dos patógenos e soluções para o controle dos micro-organismos no ambiente de ordenha, considerando-se medidas de prevenção e tratamento.

Although bacteria are the most prevalent agents in bovine mastitis, increasingly literature reported cases of the disease caused by fungi and algae of the genus Prototheca. This study aimed to generate new knowledge about the etiology and pathogenicity of bovine mastitis agents caused by fungi and algae of the genus Prototheca from morphophysiological and molecular identification, besides analysis of biofilm production capacity and susceptibility profile. For this, morphophysiological and molecular analyzes were performed of 33 yeast isolates and 40 algae of the genus Prototheca obtained from clinical and subclinical mastitis cases, systematically collected in five dairy properties in the states of São Paulo and Minas Gerais, as part of their respective mastitis control programs. The results indicated that all algae are belonging to the species Prototheca zopfii and, among the yeasts, the following species have been identified: Pichia kudriazevii (n=16; 48.5%), Candida akabanensis (n=8; 24.2% ), Candida tropicalis (n= 3; 9.1%), Cyberlindnera jadinii (n= 2; 6.1%), Candida glabrata (n= 1, 3%), Candida parapsilosis (n= 1, 3%), Candida palmioleophila (n= 1, 3%) and Candida haemulonis (n= 1, 3%). It is worth mentioning that Candida akabanensis, Candida palmioleophila and Cyberlindnera jadinii have never been described in cases of bovine mastitis. The diversity of yeasts species suggests that the use of molecular techniques has allowed the realization of more accurate diagnoses, which were not possible from conventional identification methods. For biofilm production capacity, the results showed that both yeasts as Prototheca zopfii have this ability, which is an important virulence factor for the persistence of these microorganisms in the milking environment. The susceptibility profile analysis was performed using the antifungal fluconazole. All isolates of the species P. zopfii were resistant to the drug, whereas for yeasts, three susceptibility patterns were observed: sensitive (n=6; 21.43%), dose-dependent susceptibility (n=21; 75%) and resistant (n=1; 3.57%). In epidemiological analysis for one of the dairy farms included in the study, there was no statistical difference between yeast and Prototheca zopfii in relation to variables considered. In front of these results, it was possible to observe the relevance of these micro-organisms in cases of bovine mastitis and the importance of studies for the identification of pathogens and solutions for the control of microorganisms in the milking environment, considering measures to prevent and treatment.