Polissacarídeos da biomassa do basidiomiceto Rhizoctonia solani: extração, purificação e atividade biológica

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Pós-graduação em Química - IBILCE

The Rhizoctonia solani is a phytopathogenic fungus that attacks various crops, causing the tipping of seedlings. There are several studies related to the combat this microorganism, however, no reports of its biomass chemical composition. According to the literature the fungal biomass can be a promising source of molecules for the use in biological studies. Then a novel study of the chemical composition from R. solani biomass, mainly in relation to the polysaccharides, was conducted. The microorganism was grown in Vogel minimal salts medium with glucose as carbon source. Biomass resulting from various cultivations was treated consecutively with ethanol (1:20 w/v), 78 °C, 12h, 1x) and hot distilled water (1:20 w/v, 100 °C, 4h, 4x). The aqueous extract was subjected to freezing and thawing cycles in order to separate the insoluble material. The soluble fraction was precipitated in ethanol and named PEH2O (ethanolic precipitated from aqueous extract). That fraction was analyzed by GPC and the results indicated that an additional purification procedure would be necessary. Gel filtration chromatography on Sepharose CL-6B at normal pressure, separated the PEH2O in five distinct fractions named PI to PV, which eluted in decreasing order of their molecular weight. The chromatographic analysis to verify the homogeneity degree of each peak (GPC) indicated that both PIII as PV were pure and able to be chemically characterized. The results from acid hydrolysis, methylation analysis and uni- and bidimensional nuclear magnetic resonance experiments showed that PIII is a glucan with β-D-Glcp(1→3), (1→6)-linked main chain, partially substituted at O-6 by β-D-Glcp side chains and PV a fucomannogalactan with a main chain composed by (1→6)-linked -D-Galp partially substituted in O-2 by non-reducing end-units of α- L-Fucp and α-D-Manp. Some Galp units from main chain were partially methylated at OH-3. Both...

O fungo Rhizoctonia solani, é um fitopatógeno que ataca diversas culturas, provocando o tombamento de plântulas. Há vários estudos visando o combate deste micro-organismo, no entanto, não há relatos da composição química de sua biomassa. De acordo com a literatura a biomassa fúngica pode ser uma fonte promissora de moléculas para aplicação em ensaios biológicos. A partir disso, um estudo inédito da composição química da biomassa do R. solani, principalmente em relação aos polissacarídeos, foi realizado. O micro-organismo foi cultivado em meio mínimo de Vogel com glucose como fonte de carbono. A biomassa resultante de vários cultivos foi tratada consecutivamente com etanol (1:20 m/v, 78 °C, 12h, 1x), e água destilada a quente (1:20 m/v, 100 °C, 4h, 4x). O extrato aquoso foi submetido a ciclos de congelamento e descongelamento de maneira a separar o material insolúvel da fração solúvel que foi precipitada em etanol e denominada PEH2O (precipitado etanólico do extrato aquoso). A fração solúvel foi analisada por GPC, cujos resultados indicaram a necessidade de purificação adicional. A cromatografia de filtração em gel Sepharose CL-6B, a pressão normal, separou o PEH2O em cinco frações distintas, denominadas de PI a PV, eluídas em ordem decrescente de suas massas moleculares. A análise cromatográfica para verificar o grau de homogeneidade de cada pico (GPC) indicou que tanto PIII quanto PV estavam puros e aptos a serem quimicamente caracterizados. A hidrólise ácida e os resultados das análises de metilação e ressonância magnética nuclear uni e bidimensional mostraram que PIII é uma β-D-glucana com cadeia principal formada por ligações (1→3), (1→6) e parcialmente substituída em O-6 por cadeias laterais β-D-glucopiranosídicas e PV uma fucomanogalactana com a cadeia principal formada por resíduos α-D-galactopiranosídicos (1→6) ligados, parcialmente substituídos em O-2 por unidades...