Detecção de DNA de micobactérias dos complexos M. tuberculosis e M. avium em amostras parafinadas de pacientes transplantados renais

Introduction: Tuberculosis (TB) is a granulomatous disease caused by Mycobacterium tuberculosis. The genus Mycobacteriumhas two different complexes: M. tuberculosis Complex and M. avium Complex. This is a global health epidemic and remains a major global health problem, besides, the clinical severity of TB is significantly higher in transplanted patients. The detection of these mycobacteria complexes in transplanted patients, by molecular methods, is fundamental for quick treatment of patients and can contribute for rapid and accuracy of diagnosis. Objective: To detect mycobacteria DNA of M. tuberculosis and M. avium Complexes in formalin fixed paraffin-embedded samples (FFPE) of two patients groups: non transplanted and transplanted. Materials and Methods: The study includes 40 FFPE biopsies separated in four groups: NTP – presence of epithelioid granuloma and positive ZN, non-transplanted patients – 9 samples; NTN - presence of epithelioid granuloma and negative ZN, non-transplanted patients – 10 samples; TP – positive ZN, transplanted patients – 9 samples; TN – negative ZN, transplanted patients – 7 samples. Sections were cut for DNA extraction. Samples were submitted to PCR for amplification of: a) β-actin, b) IS6110 insertion and c) IS1245 insertion. DNA evaluation was made by spectrophotometry and efficiency and PCR analysis was made by agarose gels under UV light. Results: In all samples processed, 97.1% were positive for human β-actin gene. In22.2% of NTP group were found the IS6110 insertion sequencebut the IS1245 wasn´t. In the NTN group was not found any sequence. In theTP group, 11.1% of the samples were positive for IS6110 and also 11,1% werepositive for IS1245. In the TN group, 14.3% of the samples were positive forIS6110 and for IS1245, 14.3% was also positive. Conclusion: Although factors such as DNA degradation after formalin fixation and paraffin embedding, were possible to detect DNA from the human gene ...

Introdução: A Tuberculose (TB) é uma doença granulomatosa causada por Mycobacterium tuberculosis. O gênero Mycobacterium possui dois complexos diferenciados: Complexo M. tuberculosis e Complexo M. avium. Esta é uma epidemia de saúde global e continua sendo um dos maiores problemas de saúde pública do mundo, sendo a gravidade clínica da TB significativamente maior nos doentes transplantados. A detecção de micobacterias desses Complexos em pacientes transplantados, por métodos moleculares, é fundamental para o rápido tratamento destes pacientes e pode contribuir cada vez mais para a rapidez e precisão destes exames. Objetivo: Detectar o DNA de micobactérias do Complexo M. tuberculosis e M. avium em amostras fixadas em formalina e incluídas em parafina (FFIP) de pacientes de dois grupos: não transplantados e transplantados renais. Materiais e Métodos: Foram utilizadas 40 biópsias FFIP divididas em quatro grupos: NTP - presença de granuloma epitelióide e coloração ZN “positiva”, pacientes não transplantados- 9 amostras; NTN - presença de granuloma epitelióide e coloração ZN “negativa”, pacientes não transplantados - 10 amostras; TP - coloração ZN “positiva” de pacientes transplantados – 9 amostras; TN - coloração ZN “negativa” de pacientes transplantados – 7 amostras. Cortes foram obtidos para extração de DNA. Foi realizada PCR para:a) β-actina, b) inserção IS6110 e c) inserção IS1245. Avaliação do DNA foi realizada através de espectrofotometria e rendimento (Nanodrop). A análise de PCR dos primers de inserção IS6110 e IS1245foi avaliada em gel de agarose sob luz UV. Resultados:Em 97,1% do total de amostras foram positivas para o gene β-actina humana.Em 22,2% das amostras do grupo NTP foi encontrado a Sequência de Inserção IS6110 e não foi encontrado a IS1245. No grupo NTN não foram encontrados nenhumas das sequências. No grupo TP, ...