Detecção, epidemiologia e análise molecular de rotavírus, picobirnavírus e reovírus em aves de corte criadas em granjas na mesorregião metropolitana de Belém, Pará, Brasil

Este estudo objetivou investigar a ocorrência de rotavírus aviário (RVA), picobirnavírus (PBV) e reovírus aviário (ARV) em aves de corte criadas em granjas situadas na Mesorregião Metropolitana de Belém, Pará, no período compreendido entre 2008 a 2011. Para tal, foram colhidos 85 pools de amostras fecais provenientes de 37 granjas pertencentes a oito municípios. O RNA viral foi extraído a partir das suspensões fecais e submetido à eletroforese em gel de poliacrilamida (EGPA) seguido da RT-PCR. Foi selecionada pelo menos uma amostra de cada município positivo para o sequenciamento de nucleotídeos dos genes NSP4 (rotavírus), RdRp (picobirnavírus) e S2 (reovírus), sendo que no caso dos picobirnavírus as amostras foram clonadas antes do sequenciamento. A EGPA demonstrou positividade em 0/85 (0%) amostras para RVA do grupo A, 13/85 (15,3%) amostras para PBV e 01/85 (1,2%) amostras para ARV. No caso da RT-PCR foi verificado positividade em 35/85 (41,2%), 42/85 (49,4%) e 28/85 (32,9%) das amostras para RVA, PBV e ARV, respectivamente. Dos oito municípios estudados, sete apresentaram amostras positivas para PBV e seis apresentaram amostras positivas para RVA e ARV. Das 37 granjas estudadas foi observada a presença dessas infecções virais em 19 (51,4%) para RVA e ARV e 21 (56,8%) para PBV. As sequências do gene NSP4 apresentaram entre 86,3 e 90,5% de similaridade ao nível de nucleotídeo (nt) com protótipos de frangos e 93,5 e 100% de similaridade ao nível de nt quando comparadas entre si. As sequências do gene RdRp apresentaram uma grande heterogeneidade genética com variantes gênicas apresentando entre 56,1 e 100% de similaridade ao nível de nt com protótipos pertencentes a várias espécies e fontes de contaminação e entre 50,3 e 100% de similaridade ao nível nt quando comparadas entre si. Na análise das sequências do gene S2 de ARV foi observado entre 90,9 e 94,4% de similaridade ao nível de nt com protótipos de frangos e 90,1 e 100% de similaridade ao nível de nt quando comparadas entre si. Os RVA, PBV e ARV foram detectados em granjas de frangos de corte da Mesorregião Metropolitana de Belém, sendo a detecção por RT-PCR a mais eficiente ao detectar pelo menos um dos vírus nos oito municípios pesquisados. Excetuando-se o PBV, que apresentou relacionamento heterogêneo com os protótipos utilizados, o RVA e ARV deste estudo relacionaram-se especificamente com amostras obtidas em aves. Este é o primeiro estudo envolvendo o sequenciamento gênico do RVA, PBV e ARV em frangos de corte na região norte do Brasil.

ABSTRACT: This study aimed to investigate the occurrence of avian rotavirus (AvRV), picobirnavirus (PBV) and avian reovirus (ARV) in chickens raised on farms located in the Metropolitan mesoregion of Belém, Pará state, in the period of 2008 to 2011. For this purpose, 85 pools of fecal samples were collected from 37 farms belonging to eight counties. Viral RNA was extracted from fecal suspensions and subjected to polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) followed by RT-PCR. At least one sample was selected of each municipality wich positive result for nucleotide sequencing of the genes NSP4 (AvRV), RdRp (PBV) and S2 (ARV), and in the case of the PBV samples were cloned before sequencing. PAGE showed positive in 0/85 (0%) samples for AvRV group A, 13/85 (15.3%) samples for PBV and 01/85 (1.2%) samples for ARV. In the case of RT-PCR positive results was observed in 35/85 (41.2%), 42/85 (49.4%) and 28/85 (32.9%) of the samples for AvRV, ARV and PBV, respectively. Of the eight counties studied, seven showed positivity to PBV, and six for AvRV and ARV. Of the 37 farms studied the presence of these viral infections was observed in 19 (51.4%) to AvRV and ARV and 21 (56.8%) to PBV. NSP4 gene sequences had a similarity between 86.3 and 90.5% at the nucleotide level (nt) with prototypes from chicken and 93.5 and 100% similarity at the nt level when compared among them. RdRp sequences showed a high genetic heterogeneity with gene variants resulting between 56.1 and 100% similarity at the nt level with prototypes belonging to different species and sources of contamination and between 50.3 and 100% similarity at nt level when compared among them. S2 gene sequences analysis showed between 90.9 and 94.4% similarity at the nt level with chicken prototypes and 90.1 and 100% similarity at the nt level when compared each other. AvRV, ARV and PBV were detected in broiler farms of the Metropolitan mesoregion of Belém, being the detection by RT-PCR more efficient to detect at least one type of virus in the eight counties surveyed. Except for the PBV, which showed heterogeneous relationship with the prototypes used, the AvRV and ARV of this study related specifically to the samples obtained in birds. This is the first study involving the genomic sequencing of the AvRV, ARV and PBV in broilers in northern Brazil.