Expressão in vitro da cicloxigenase-2 (Cox2) no osteossarcoma exposto a inibidores seletivo da Cox2

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Pós-graduação em Medicina Veterinária - FMVZ

O comportamento biológico altamente metastático e localmente agressivo é marca dos tumores ósseos malignos do cão, sua importância deve-se à dificuldades na conduta terapêutica. Para testar a hipótese, o trabalho se propôs a investigar a Cox2, proteína alvo para tratamento, com identificação e quantificação dos marcadores da proliferação: Ki-67; apoptose: caspase-3, p53, Bcl-2 e Bax; invasão: MMP-2 e MMP-9; e formação de vasos: VEGF. Cinco cães com suspeitas clínicas e radiológicas, e posterior diagnóstico citopatológico e histopatológico de osteossarcoma de ocorrência espontânea, que foram submetidos à cirurgia. Obtive-se de cada animal o isolamento e caracterização dos cultivos primários. Os diferentes cultivos foram expostos a inibidor seletivo da Cox2, o celecoxibe, no qual houve diferença (p ≤ 0,05) para os cultivos Cox2 positivos em relação aos negativos, com maior indução à necrose. Em 72h observou-se maior porcentagem de células vivas, menor de células em apoptose e maior de células em necrose em relação aos grupos de 24h e 48h. Houve tendência (p=0,08) na redução da porcentagem de células em necrose para os grupos de 100M.L-1 quando comparados aos grupos de 10M.L-1. Independente do método, os fatores que induzem crescimento vascular, proliferação, morte e invasão, inerentes as etapas da carcinogênese, são complexos Não foi possível determinar o papel individual de cada um destes fatores. A metodologia empregada se mostrou eficaz para determinar o padrão histológico das amostras. Logo, o cultivo primário se comportou como modelo ideal para estudo do OSA, visto que suas características de agressividade tumoral não se perderam quando comparados aos métodos citados

A high metastatic behavior and site aggressiveness are common features of bone malignant tumors in the dog and they are important owing to their therapeutic difficulties. The objective of this study was to validate such hypothesis by investigating the Cox2 (therapy’s target protein) via the identification and quantification of markers for proliferation (Ki-67), apoptosis (caspase-3, p53, Bcl-2 and Bax), invasion (MMP-2 and MMP-9) and vessel formation (VEGF). Five dogs diagnosed as having spontaneous osteosarcoma (clinical, radiological, cytopathological and histopathological diagnosis) underwent tumor removal surgery and it was isolated and characterized the primary culture of each animal. All cultures were exposed to a Cox2 selective inhibitor named celecoxibe. There was difference (p ≤ 0,05) between Cox2 positive cultures and Cox2 negative ones. The positive ones presented higher necrosis induction. The 72h group presented higher percentage of live cells and cells undergoing necrosis when compared to the 24h and 48h groups. Nevertheless, the 72h group presented lower percentage of cells in apoptosis. Cells undergoing necrosis tended be in a lower percentage (p=0,08) for the 100M.L-1 groups when compared to the 10M.L-1. Regardless of methodology, the factors that induce vascular growth, proliferation, death, and invasion in different phases of the carcinogenesis are complex. It was no yet possible to determine the individual role from each of these factors. The methodology applied in this experiment was efficient in determining the histological standard of these samples. Hence, the primary culture may be used as an ideal model for the OSA study as the tumor aggressive characteristics were not lost when compared to the previously mentioned methods