Quantificação de citocinas no líquido amniótico de bezerros nelore oriundos de produção in vitro, tranferência de embrião e inseminação artificial colhido no momento do parto

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Pós-graduação em Medicina Veterinária - FMVZ

Tendo em vista, a incidência de problemas fetais observados no momento do parto de animais produzidos in vitro (PIV) e a escassez de literatura nesta área, o presente estudo teve por objetivo determinar os níveis de fator de necrose tumoral-alfa (TNF-), interferon-gama (IFN-), interleucina-6 (IL-6) e IL-8 no fluido amniótico de bezerros oriundos de PIV comparando com aqueles obtidos pela transferência de embrião convencional e inseminação artificial no momento do parto, na tentativa de auxiliar na resolução de problemas ainda pouco conhecidos que são observados a campo durante emprego comercial da PIV. Foram utilizados sessenta animais divididos em grupo 01: vinte vacas gestando bezerros da raça Nelore PO de inovulações de embriões oriundos de doadoras superovuladas pelo método convencional (TE); grupo 02: vinte vacas gestando bezerros Nelore PO de inovulações de embriões oriundos de PIV; grupo 03: vinte vacas Nelore PO gestando bezerros oriundos de inseminação artificial (IA) - controle. Todos os partos dos animais do experimento foram observados. Durante a fase de expulsão e após a ruptura do alantocórion, foi realizada a punção do âmnion para a colheita de 15mL de líquido amniótico utilizando-se agulhas e seringas descartáveis compatíveis. O material foi depositado em tubo plástico e congelado em freezer para posterior análise laboratorial. O acompanhamento do padrão de desenvolvimento dos bezerros no periparto foi realizado. Após a descongelação das amostras foi realizado ensaio imunoenzimático (ELISA) para a dosagem de TNF-, com emprego do Kit comercial: ESS0011 - Bovine TNF Alpha, para IFN- foi Kit comercial: ESS0026 - Bovine IFN-, para IL-6 foi Kit comercial: ESS0029 - Bovine IL-6 da Pierce Biotechnology e para IL-8 Kit...

In view, the incidence of fetal problems seen at the time of birth of animals in vitro production and the be short of the literature in this area, this study aimed to determine the levels of tumor necrosis factor (TNF-), interferon-gamma (IFN-), interleukin-6 (IL-6) and IL-8 in amniotic fluid of calves from in vitro production (IVP) compared with those obtained by conventional embryo transfer and artificial insemination at the delivery, in an attempt to assist in solving problems that are still little known observed in simulations and the experimental field of commercial employment during IVP. Sixty animals used were divided into groups: 1 - Twenty Nelore cross-breed cows pregnant with Nelore calves of embryos transfer conventional method (ET); 2 - Twenty Nelore cross-breed cows pregnant with Nelore calves obtained by in vitro production after follicular aspiration; 3 - Twenty pregnant Nelore cows bearing calves obtained by artificial insemination (AI). All births of the animals of the experiment were observed. During the expulsion phase the amnion was punctured and 15mL of fluid were collected using a needle and syringes compatible. The material was deposited on plastic tube and frozen in freezer for later analysis. Monitoring the pattern of development of the calves in peripartum was performed. The cytokines levels were measured by immunoenzymatic assay (ELISA). The commercial kit used was: ESS0011 - Bovine TNF Alpha, ESS0026 - Bovine IFN- gamma, ESS0029 - Bovine IL-6 Pierce Biotechnology and comercial Kit: D8000C - Human IL-8 of the R & D Systems. The protocol was performed according to the manufacturer´s recommendations. The densities were evaluated in automatic optical reader ELISA. The well plates were read at 450nm. The Kruskal-Wallis Test was used for statistical analysis... (Complete abstract click electronic access below)