Ação de diferentes fotossensibilizadores na terapia fotodinâmica antimicrobiana

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Pós-graduação em Biopatologia Bucal - ICT

Esse estudo teve como objetivo avaliar a ação dos fotossensibilizadores azul de metileno, azul de toluidina e verde de malaquita em conjunto com um laser de baixa intensidade sobre cepas planctônicas e biofilmes de Staphylococcus aureus, Escherichia coli e Candida albicans. Em cada grupo, foram estudadas cinco cepas clínicas e uma cepa padrão. A formação do biofilme foi realizada colocando-se a suspensão microbiana em contato com corpos-de-prova e o meio de cultura BHI por 4 dias a 37ºC. Os fotossensibilizadores foram preparados nas concentrações de 3000, 1800, 600, 300, 150, 75 e 37,5 μM. Foi adicionado ao fotossensibilizador a suspensão de microrganismos para o estudo das células planctônicas e biofilme. Os ensaios foram executados utilizandose um laser de Arseneto de Gálio e Alumínio (660 nm). Os grupos controles foram radiados nas mesmas condições, entretanto não receberam fotossensibilizador. Para estudo das células planctônicas, após radiação, foram realizadas diluições e semeaduras em ágar BHI ou Sabouraud. Após incubação, foi feita a contagem de UFC/mL. Para análise do biofilme, após radiação, os corpos-de-prova foram submetidos à homogeneização ultra-sônica e as células dispersas foram semeadas em ágar BHI ou Sabouraud (37°C por 24 a 48 horas) para a contagem de UFC/corpo-de-prova. Os resultados foram submetidos à análise estatística descritiva. A redução de UFC/mL foi de 0,4 a 6,53 log10 dependente do microrganismo e fotossensibilizador testado. As concentrações mais eficazes dos fotossensibilizadores variaram entre 37,5 a 1800 μM para o azul de metileno, 37,5 a 300 μM para o azul de toluidina e 300 a 3000 μM para o verde de malaquita. A maior redução microbiana observada ocorreu com o fotossensibilizador verde de malaquita. Concluiu-se que os fotossensibilizadores estudados foram eficazes na redução dos microrganismos testados após a realização da terapia fotodinâmica

The purpose of this study will be evaluate the action of photosensitizers methylene blue, toluidine blue and malachite green for photodynamic antimicrobial therapy on planctonic and biofilm strains of Staphylococcus aureus, Escherichia coli and Candida albicans. In each group ten strains will be studied (1 ATCC and 5 clinical strain). An acrylic resin applying will be used for biofilm formation that will be immersed in steribe brain-heart infusion (BHI) broth containing 5% sacarose, then inoculated with standardized suspension of microorganisms and incubated at 37º C for four days. The photosensitizer will be prepared in the following concentrations: 3.000, 1.800, 600, 300, 150, 75, 37,5 μM and will be immersed the applying containing biofilm. The light source used will be a diode laser, with output power of 100mW and wavelength of 660nm. The control group will be treated under same condition, without photosesitizer. For the planctonic cells study, after irradiation, serial dilutions will be obtained from each sample in physiological solution and aliquots of 0,1ml will planted on BHI or Saboraud dextrose agar. After incubation at 37ºC for 24 or 48 hours the number of colony forming units will be calculated. For the biofim study, after irradiation the acrylic resin applying will be submitted to an ultrasonic homogenization. Serial dilution will be prepared and plated on BHI or Sabouraud dextrose agar. After incubation at 37ºC for 24 or 48 hours the number of colony forming units will be calculated. The results will be submitted to statistical analysis. The most effective concentrations of photosensitizers ranged from 37.5 to 1800 μM for methylene blue, 37.5 to 300 μM for toluidine blue and from 300 to 3000 μM for malachite green. Most microbial reduction was observed with the photosensitizer malachite green. It was concluded that the photosensitizers studied were effective in reducing microorganisms after photodynamic therapy