O uso de um sistema LC-ESI-IT-TOF/MS e MSn na prospecção de novos componentes peptídicos do veneno da vespa social Polybia paulista

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Pós-graduação em Ciências Biológicas (Biologia Celular e Molecular) - IBRC

O desenvolvimento dos venenos e aparelhos de ferroar entre os Insecta representa um atributo evolutivo que contribuiu para a adaptação dos insetos em muitos ambientes terrestres diferentes. Os venenos desses insetos são misturas complexas de compostos biologicamente ativos, tais como compostos de baixa massa molecular, peptídeos e proteínas. Estudos recentes têm demonstrado a capacidade de se detectar e identificar diferentes compostos de natureza peptídica, em concentrações bastante reduzidas nos venenos animais, utilizando-se diferentes abordagens de espectrometria de massas. Isso tem permitido a construção de bibliotecas peptídicas de grande interesse aplicado à biotecnologia. O veneno da vespa social Polybia paulista tem sido intensamente investigado, porém somente os peptídeos mais abundantes deste veneno são conhecidos: os mastoparanos Polybia -MPI e -MPII, o peptídeo quimiotáctico Polybia-CP e a Paulistina. Este fato deve-se principalmente à utilização de abordagens clássicas até então, com coletas “off-line” em relação às análises de sequenciamento, fazendo com que somente os peptídeos mais abundantes pudessem ser investigados. Com os avanços na área da espectrometria de massas, incluindo o desenvolvimento da tecnologia de analisadores do tipo “ion-trap” utilizado no presente trabalho, tornou-se possível a investigação de amostras pouco abundantes, com alta velocidade de aquisição de dados e elevada resolução. O presente estudo visou a obtenção de um perfil peptídico detalhado do veneno de P. paulista por uma abordagem analítica moderna e mais sensível, além de padronizar o sequenciamento destes peptídeos por espectrometria de massas sequencial de maneira “on-line”. Os peptídeos foram detectados e sequenciados utilizando-se um sistema LC-ESI-IT-TOF/MS e MSn...

The evolution of venoms and their injection apparatuses among the Insecta represents an evolutionary attribute which contributed for thr adaptation of the insects to many different terrestrial environments. The venoms of insects are complex mixtures of biologically active compounds, such as low molecular mass compounds, peptides and proteins. Recent studies have demonstrated the ability to detect and identify different compounds in very low concentrations in animal venoms, using different approaches of mass spectrometry. This has allowed the construction of peptide libraries of great applied interest in biotechnology. The venom of the social wasp Polybia paulista has been intensively investigated, but only the most abundant peptides of this venom are known: the mastoparans Polybia-MPI and -MPII, the chemotactic peptide Polybia-CP and the Paulistine. This fact is mainly due to the use of classical approaches, using offline collections in relation to peptide sequencing, so only the more abundant peptides could be investigated. With the advances in mass spectrometry, including the development of analyzers type ion-trap as the one used in present work, it became possible to investigate low abundance samples, with high speed of data acquisition at high resolution. The objective of this study was to profile and sequence the peptide compounds present in the venom of the social wasp P. paulista using a modern and very sensitive analytical technique, and standardize the sequencing of peptides by high resolution LC-MS and MSn strategy. Peptides were detected and sequenced using a LCESI- IT-TOF/MS and MSn system of high resolution and sensitivity. The analysis of the venom was performed by high performance liquid chromatography on a reverse phase (HPLC), and the analytes (peptides) were characterized ... (Complete abstract click electronic access below)