Estudo de transições durante o processo de desenovelamento térmico da RNase A por meio da calorimetria (DSC) e espectroscopia de correlação bidimensional no infravermelho médio (2D-IR)

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Pós-graduação em Biofísica Molecular - IBILCE

Esse trabalho tem por objetivo estudar as transições conformacionais, induzidas termicamente, na Ribonuclease A. Esta abordagem foi realizada aplicando!se a técnica de calorimetria diferencial de varredura (DSC) e infravermelho médio com transformada de Fourier (FTIR), associando a técnica de análise de correlação bidimensional (2D! COS), variável!variável (VV) e sample sample (SS). A partir dos dados de DSC determinamos a variação de entalpia do sistema (∆Hcal) que foi de 587 kJ/mol. Também identificamos as temperaturas de pré (36, 39, 43, 49 e 59°C), pós transição (71°C) e temperatura de melting (65°C), além da determinação do ∆Hcal para cada uma das transições. A análise de correlação bidimensional sample!sample (SS) também foi capaz de identificar as mesmas temperaturas encontradas por DSC. Por sua vez, a análise de correlação bidimensional variável!variável (VV) descreveu a evolução conformacional das estruturas secundárias da proteína durante o desenovelamento térmico

This work aims to study the thermally!induced conformational transitions in Ribonuclease A. This approach was performed by applying the technique of differential scanning calorimetry (DSC) and medium infrared Fourier transform spectroscopy (FTIR), linking the technique of correlation analysis (2D!COS), variable!variable (VV) and sample !sample (SS). From DSC data determine the enthalpy change of the system (SHcal) which was 587 kJ / mol. We identified the pre temperatures (36, 39, 43, 49 and 59 ° C), post transition (71 ° C) and melting temperature (65 ° C), besides determination of SHcal for each transition. The two!dimensional correlation analysis sample! sample (SS) was also able to identify the same temperatures found by DSC. In turn, the two!dimensional correlation analysis of variable!variable (VV) described the conformation evolution of the protein secondary structures during thermal unfolding