Influência da laserterapia na proliferação de células-tronco do ligamento periodontal humano

Low level laser irradiation (LLLI) has been used in Dentistry to promote wound healing and tissue regeneration. The literature shows a positive effect of LLLI on cell proliferation, but little is known about their effectiveness in promoting stem cells proliferation. The aim of this study was to evaluate the effect of LLLI on the proliferative rate of human periodontal ligament stem cells. Extracts of periodontal ligament were isolated from two third molars removed by surgical and/or orthodontic indication. After enzymatic digestion, the cells were grown in α-MEM culture medium supplemented with antibiotics and 15% fetal bovine serum. On the third subculture, the cells were irradiated with a InGaAlP-diode laser, using two different energy densities (0,5J/cm 2 - 16 seconds and 1,0J/cm² - 33 seconds), with wavelength of 660nm and output power of 30mW. A new irradiation, using the same parameters, was performed 48h after the first. A control group (non irradiated) was kept under the same experimental culture conditions. The Trypan blue exclusion test and the mitochondrial activity of the cells measured by MTT [3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-Diphenyltetrazolium Bromide] essay were performed to assess the cell proliferation in the intervals of 0, 24, 48 e 72 h after irradiation. The data of cell counts were submitted to nonparametrical statistical tests (Kruskal-Wallis and Mann-Whitney), considering a confidence interval of 95%. DAPI (4 -6-Diamidino-2-phenylindole) staining of the cells was performed at 72h interval to evaluate possible nuclear morphological changes induced by LLLI. The results of this study show that the energy density of 1,0 J/cm² promoted greater cell proliferation compared to the other groups (control and 0,5 J/cm²) at intervals of 48 and 72h. The mitochondrial activity measured by MTT essay showed similar results to the Trypan blue cell counting test. The group irradiated with 1,0J/cm² exhibited a significantly higher MTT activity in the intervals of 48 and 72h, when compared to the group irradiated with 0,5J/cm². No nuclear morphological change was observed in the cells from the three groups studied. It is concluded that LLLI has stimulatory effects on the proliferation of human periodontal ligament stem cells. Therefore, the use of laser irradiation in this cell type may be important to promote future advances in periodontal regeneration

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior

O laser de baixa intensidade (LBI) tem sido utilizado na Odontologia com a finalidade de promover cicatrização e regeneração dos tecidos. A literatura mostra um efeito positivo do LBI na proliferação celular, porém pouco se sabe sobre a sua eficácia na proliferação de células-tronco. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da irradiação do LBI na taxa proliferativa de células -tronco do ligamento periodontal humano. Extratos de ligamento periodontal foram isolados de dois terceiros molares hígidos removidos por indicaç ão cirúrgica e/ou ortodôntica. Após a digestão enzimática, as células foram cultivadas em meio de cultura α-MEM suplementado com antibióticos e 15% de soro fetal bovino. No terceiro subcultivo, as células foram irradiadas com um laser diodo InGaAlP, utilizando-se duas diferentes densidades de energia (0,5J/cm 2 - 16 segundos e 1,0J/cm² - 33 segundos), comprimento de onda de 660nm e potência de 30mW. Uma nova irradiação, utilizando os mesmos parâmetros, foi realizada 48 h após a primeira. Um grupo controle (não irradiado) foi mantido nas mesmas condições experimentais de cultivo. O método de exclusão por azul de Tripan e a atividade mitocondrial das células medida através do ensaio de MTT [brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazólio], nos intervalos de 0, 24, 48 e 72 h pós-irradiação, foram utilizados a fim de avaliar a proliferação celular. Os dados das contagens celulares foram submetidos a testes estatísticos não paramétricos de Kruskal-Wallis e Mann-Whitney, considerando um intervalo de confiança de 95%. Com o objetivo de verificar possíveis alterações morfológicas nucleares induzidas pelo laser, as células foram submetidas à marcação com DAPI (4 -6-Diamidino-2-phenylindole) no intervalo de 72 h. Os resultados do presente estudo mostraram que a densidade de energia de 1,0 J/cm² promoveu maior proliferação das células em comparação com os outros grupos (controle e laser 0,5 J/cm²) nos intervalos de 48 e 72 h. A atividade mitocondrial, medida pelo ensaio de MTT, apresentou resultados semelhantes às contagem celulares com azul de Tripan, com o grupo irradiado com 1,0 J/cm² exibindo uma atividade significativamente maior do MTT nos intervalos de 48 e 72 h, quando comparado com o grupo irradiado com 0,5 J/cm². Nenhuma alteração morfológica nuclear foi observada, tanto das células do grupo controle quanto nas células irradiadas. Conclui-se que o LBI apresenta efeitos estimulantes sobre a proliferação de células-tronco do ligamento periodontal humano. Portanto, a aplicação da laserterapia neste tipo celular pode ser importante para futuros avanços na regeneração periodontal