Avaliação de diferentes formas de preservação e desenvolvimento in situ de folículos ovarianos pré-antrais caprinos

This study evaluated the effect of indole-3-acetic acid (IAA) in the activation of goats preantral follicles (FOPA). Were used four pairs of ovaries of adult mixed breed goats. Each ovarian pair was divided into 23 fragments. One fragment was fixed for histology and other fragment was using to follicular isolation procedure. The remaining fragments were cultured in 1.0 ml of Minimum Essential Medium (MEM) or MEM supplemented with IAA at concentrations of 10, 40, 100, 500 or 1000 ng/mL. The in vitro culture was performed at 39°C in incubator with 5% CO2 for 1, 3 and 5 days. After in vitro culture was evaluated histological integrity and viability of FOPA. The addition of 100 ng/ml of IAA to MEM showed a significant increase in follicles transition in the third day of in vitro culture, characterizing follicular activation. Moreover, this concentration was obtained maintaining the histological integrity of PAF by the fifth day of in vitro culture. The viability test confirmed the results of histology. Thus, we conclude that IAA can promote the activation of goats FOPA

Objetivos: avaliar o efeito do ácido 3-indol-acético (IAA) na conservação de folículos pré-antrais caprinos in situ e isolados; e promover a ativação de folículos pré-antrais caprinos em sistemas de cultivo in vitro. Método: para alcançar os objetivos traçados, este projeto foi dividido em duas etapas. Etapa 1- conservação de folículos pré-antrais. Nesta etapa foram utilizados 4 pares de ovários de cabras adultas sem raça definida. De cada par ovariano, um ovário foi destinado ao isolamento mecânico. Uma amostra da suspensão de folículos pré-antrais isolados obtida foi imediatamente analisada (tratamento 1 controle). O outro ovário foi cortado em pequenos fragmentos. Os folículos pré-antrais isolados e os fragmentos ovarianos foram conservados em TCM 199+ ou TCM 199+ + IAA a 4oC, 20oC ou 39oC por 4h, 12h ou 24 h. Após o período de conservação, os fragmentos ovarianos foram submetidos ao isolamento folicular. No controle e após o período de conservação, a viabilidade folicular foi avaliada com azul de tripan e pela técnica fluorescência. Etapa 2- ativação in vitro de folículos pré-antrais. Para esta etapa foram utilizados 4 pares de ovários de cabras adultas sem raça definida. Cada par ovariano foi dividido em 23 fragmentos. Um deles foi fixado para histologia clássica e outro destinado ao procedimento de isolamento folicular. Os fragmentos restantes foram cultivados em 1,0 mL de Meio Essencial Mínimo (MEM) ou MEM acrescido de IAA nas concentrações de 10, 40, 100, 500 ou 1000 ng/mL. O cultivo foi realizado a 39°C, em estufa com 5% de CO2, durante 1, 3 e 5 dias. Após o cultivo foi avaliada a integridade histológica e a viabilidade dos folículos ovarianos pré-antrais. Resultados: Etapa 1- os folículos pré-antrais conservados isolados a 4oC em TCM 199+ por 4h e em TCM 199+ + IAA por 4h e 12 h; e a 20oC em x TCM 199+ + IAA for 4 h mantiveram a viabilidade folicular semelhante ao controle. Os folículos pré-antrais conservados em pequenos fragmentos de tecido ovariano, preservaram em ambas as soluções a 4oC por até 24 h e em TCM 199+ + IAA a 20oC por 4 h, a percentagem de viabilidade similar ao do controle. Etapa 2 - a adição de 100 ng/ml de IAA ao MEM possibilitou uma redução significativa dos folículos primordiais seguida de aumento significativo de folículos de transição no terceiro dia de cultivo, caracterizando a ativação folicular. Além disso, nesta concentração foi obtida também a manutenção da integridade histológica dos folículos pré-antrais até o quinto dia de cultivo. O teste de viabilidade confirmou os resultados da histologia clássica. Conclusões: este estudo mostrou que o IAA na concentração de 100 ng/mL favorece a conservação de folículos pré-antrais caprinos in situ ou isolados a 4o e a 20oC e que o IAA pode promove a ativação de folículos pré-antrais caprinos cultivados in vitro