Introducció experimental a la biotecnologia amb clavellina: cultiu in vitro

Treball de recerca realitzat per una alumna d'ensenyament secundari i guardonat amb un Premi CIRIT per fomentar l'esperit científic del Jovent l'any 2009. Es tracta d’una recerca experimental en la que s’han assajat vuit tècniques de cultiu in vitro amb clavellina. El material vegetal s’ha esterilitzat per immersió en una solució diluïda de lleixiu i s’ha manipulat de manera estèril. En tots els casos el medi de cultiu utilitzat ha estat el MS amb una concentració de sacarosa i reguladors de creixement variable segons l’experiment. La incubació dels cultius s’han dut a terme en una cambra amb control de fotoperíode durant 4 setmanes. Els diferents reguladors de creixement han mostrat un clar efecte sobre les seccions de tija. Els explants cultivats en medi lliure d’hormones han crescut menys que els exposats a diverses concentracions de NAA i BA. Aquests tractaments hormonals han originat símptomes de creixement anòmals (engruiximents a la base i vitrificació). La presencia de 2,4-D ha afavorit la formació de cal•lus i d’arrels per organogènesi adventícia indirecta. L’obtenció de plàntules per germinació in vitro de llavors ha permès reduir notablement les pèrdues per contaminació, mentre que el subcultiu d’aquestes ha donat unes tases de micropropagació de 7.2 seccions/plàntula. Ha estat possible aclimatar aquestes vitroplantes per tal d’adaptar-les a les condicions de camp. No hem pogut obtenir organogènesis adventícia ni embriogènesi somàtica a partir d anteres ni hem pogut iniciar un cultiu de cèl•lules a partir dels cal•lus. Tot i la complexitat d’aquestes tècniques, és possible dur-les a terme en un laboratori escolar.

Research project carried out by a pupil of secondary education and rewarded with a Prize CIRIT to foster the scientific spirit of the Youth in year 2009. It has been conducted eight different in vitro culture techniques in an experimental research. All the vegetal material was sterilized by immersion in a bleach diluted solution and manipulations were carried out in a sterile way. In all cases the culture medium used was MS with different concentrations of saccharose and plant hormones according to the experimental design. Cultures were carried out in a chamber with photoperiodic control during a period of 4 weeks. Different levels of plant growth regulators showed a clear effect on development of explants. Those exposed to hormone free media have grown less than those exposed to different concentrations of NAA and BA, and have not shown any symptoms of anomalous growth (thickening in the basis and vitrification). 2,4-D favoured the formation of callus and roots from indirect adventitious organogenesis. The use of plantlets obtained from in vitro germination of seeds notably reduced the losses due to contamination. The subculture of sections of in vitro plantlets gave micropropagation taxes of 7.2 sections/plantlet. It was possible to acclimatate these vitroplants to the field conditions in order to adapt them. It has not been able to be obtained adventitious organogenesis not even somatic embriogenesis from anthers. Also, it was not possible to obtain a viable cell culture from calluses obtained previously. Despite the complexity of in vitro culture techniques it’s possible to carry them out in a school laboratory.