Comparació dels sistemes "ribosome skipping" i "splicing acceptor" per a l'expressió de transgenes en adenovirus oncolítics

Report for the scientific sojourn carried out at the University of St. Andrews, United Kingdom, from November 2007 until January 2008. Therapeutic transgene expression is a valuable strategy to counteract the limitations associated with oncolytic adenoviruses. Late phase expression is desirable to avoid early cell death for proper virus production. In this 3 months-collaboration, we have constructed a late expression system based on ribosome skipping downstream fiber protein and compared it with a splicing-based method of late gene expression. Despite expressing high amounts of the transgene when utilizing the ribosome skipping-system, flow cytomety assays indicate a delayed transgene-expression kinetics compared with the splicing-based one. Furthermore, when using the ribosome skipping system not only fiber protein expression is more altered but also viral production. These results suggest splicing-based expression strategy as a more suitable system for expression of transgenes late in the viral life cycle of an oncolytic adenovirus.

Estudi realitzat a partir d’una estada a la University of St. Andrews, Gran Bretanya, entre novembre 2007 i gener del 2008. L’expressió de transgens terapèutics és una estratègia molt a tenir en compte a l’hora de resoldre les limitacions associades a la teràpia amb adenovirus oncolítics. A més, l’expressió d’aquests transgens ha de ser durant la fase tardana de la replicació adenoviral per evitar la interferència de l’expressió del transgen amb la replicació viral. S’ha construït un nou sistema d’expressió tardana de transgens en adenovirus oncolítics basat en ribosome skipping i l’hem comparat amb un sistema ja existent basat en un splicing acceptor. Malgrat expressar grans quantitats de transgen, experiments de citomertria de flux indiquen una cinètica d’expressió retardada quan comparem amb el sistema basat en splicing. A més, utilitzant el nou sistema, tant la replicació viral com l’expressió de les altres proteïnes tardanes de l’adenovirus es veuen més alterades. Així, aquests resultats suggereixen que el sistema basat en un splicing acceptor és més adequat per a l’expressió de transgens tardans en adenovirus oncolítics.