Redirecció de l'especificitat de les cél·lules T contra epítops del VIH restringit per la HLA-A2 mitjaçant transferència genética

Existeixen creixents evidències què la resposta dels limfòcits T CD8+ alpha beta citotòxics (CTLs) és un element fonamental en la infecció produïda pel VIH. Les CTLs VIH especifiques es consideren molt importants en la reducció de la càrrega viral i en la contenció de la infecció. Encara que la combinació dels antiretrovirals (HAART) ha suposat una millora considerable en la lluita contra el VIH induint una important reducció de la càrrega viral i augmentant el nombre de cèl•lules T CD4+, diverses complicacions han fet ressaltar la necessitat de noves alternatives terapèutiques. Les complicacions inclouen: manca de recuperació d’una resposta immune sòlida contra el VIH, toxicitat a llarg termini de la teràpia i el descobriment que les cèl•lules T CD4+ constitueixen un reservori pel virus. Les noves alternatives controlaran la replicació viral i reconstituiran la immunitat. L’eficàcia de la immunoteràpia cel•lular amb transferència adoptiva de CTLs virals específics s’ha provat en diferents infeccions virals humanes, incloent el VIH. Proposem una modificació de la immunoteràpia adoptiva redirigint l’especificitat de les cèl•lules T contra el VIH mitjançant la transfecció dels gens del TCR. En aquest assaig preclínic, ens aprofitarem de la tecnologia dels animals transgènics per les molècules de HLA, amb la finalitat de generar TCRs d’alta afinitat dirigits contra epitops del VIH restringits per la molècula HLA. Aquests TCRs seran induïts in vivo i seleccionats in vitro. Les cadenes alpha i beta dels TCRs VIH específics procedents de les CTLs seran clonades mitjançant tècniques de biologia molecular. Aquests TCRs VIH específics seran transferits a cèl•lules T CD8+ humanes i la seva especificitat i capacitat citolítica contra cèl•lules diana que presentin antígens de VIH-1 s’estudiaran mitjançant la combinació de diverses tècniques noves (FCC, transfecció mitjançant Nucleoefector). Finalment, una construcció retroviral adient per la seva transducció en cèl•lules T humanes s’establirà amb un TCR òptim seleccionat.

There is accumulating evidence that CD8+ alpha beta cytotoxic T lymphocyte (CTL) response is a major immune effector arm against HIV infection. HIV-specific CTLs are considered to be important in reducing viral load and containing infection. Although antiretroviral drug regimen combining inhibitors of the HIV reverse transcriptase and protease (the so called HAART) have been a major challenge in HIV therapy by inducing major reductions in viral load and increases in CD4+ T cell numbers, several complications emphasize the need for new approaches and alternatives. These complications include: Lack of restoration of a solid immunity against HIV, the toxicities of long-term therapy and the discovery that resting CD4+ T cells can provide a reservoir for HIV. These new approaches should control HIV replication and reconstitute immunity. The efficacy of cellular immunotherapy by adoptive transfer of viral-specific CTLs has been tested in different human viral infections, including HIV. We propose to modify this adoptive immunotherapy by redirecting the T cell specificity against HIV by TCR gene transfer. On this preclinical trial, we will take the advantage of HLA-transgenic mice technology in order to generate high affinity TCRs against HIV/HLA-A2 restricted epitopes, induced in vivo and selected in vitro. TCRalpha andbeta from HIV-specific CD8+ T cell clones will be cloned by molecular biology techniques. These HIV-specific TCRs will be transferred to human CD8+ T cells, and their specifity and cytolitic capabilities against target cells presenting HIV-1 antigens will be studied with a combination of novel techniques (Nucleoefector enhanced primary cell transfection, Flow-cytometry CTL assay, FCC). Finally, a retroviral construct, suitable for human T cell transduction, will be established with the selected optimal TCR.