Determinação de psicofármacos em cabelo humano por técnicas cromatográficas hifenadas: um método alternativo não-invasivo

Dissertação de mestrado em Técnicas de Caracterização e Análise Química

Os psicofármacos são um grupo de fármacos utilizado no tratamento de doenças como a ansiedade e a depressão, patologias de elevada prevalência em todo o mundo. Os antidepressivos são os psicofármacos de eleição para o tratamento da depressão, todavia o efeito completo deste tipo de fármacos tende a manifestar-se somente após 4 a 8 semanas de toma, pelo que são frequentemente coadministrados com benzodiazepinas (BDZs) durante as primeiras semanas, de modo a se obter uma sensação de alívio a curto prazo. As BDZs são os fármacos de referência para o tratamento da ansiedade, estando muitas vezes relacionadas com crimes facilitados por drogas, como roubos, violações e jogos fraudulentos, assim como com acidentes de viação. Frequentemente são utilizadas em tentativas de suicídio, no alívio da ansiedade ou da insónia causada pelo abuso de drogas como metanfetaminas, opióides, cocaína ou álcool, podendo exercer um efeito aditivo quando tomadas concomitantemente. Atualmente o elevado consumo de drogas de abuso e de fármacos é transversal a diversos setores da sociedade, colocando preocupações que justificam a existência de técnicas de monitorização. O sangue e a urina são as amostras convencionais para a determinação da exposição a drogas. Todavia, no decorrer dos últimos anos tem ocorrido um crescente interesse na utilização de outras matrizes biológicas. O cabelo é uma matriz biológica de recolha não-invasiva cuja análise permite a deteção de vestígios de substâncias químicas consumidas mesmo depois da completa excreção destas pelo organismo, possibilitando o estabelecimento de perfis da exposição a xenobióticos, de semanas a anos. Este estudo focou-se no desenvolvimento e validação de uma metodologia analítica para a deteção e quantificação de psicofármacos em cabelo humano recorrendo à cromatografia líquida acoplada à espetrometria de massa tandem (LC-MS/MS). Os psicofármacos em estudo foram a venlafaxina, a imipramina, a fluoxetina, a agomelatina, o diazepam e o principal metabolito do alprazolam, o alfa-hidroxialprazolam. Numa primeira fase do trabalho procedeu-se à otimização das condições de separação, identificação e quantificação dos analitos alvo. O tempo de retenção (tR), duas transições obtidas por monitorização seletiva de reações (SRM) e o rácio entre estas duas transições foram utilizados para a identificação dos analitos. A quantificação foi realizada utilizando o método do padrão interno (PI). O método foi posteriormente validado através da avaliação de diversos parâmetros de desempenho, nomeadamente linearidade, gama de trabalho, limiares analíticos, repetibilidade, precisão intermédia e exatidão. Por fim, o método desenvolvido foi aplicado à quantificação dos analitos em estudo em amostras de cabelo recolhidas de pacientes que tomam cronicamente um ou mais dos psicofármacos selecionados.

Psychiatric drugs are a group of pharmaceuticals used to treat diseases such as anxiety and depression, which have high prevalence worldwide. Antidepressants are the preferred psychiatric drugs for the treatment of depression, but its full effect tends to manifest only after 4 to 8 weeks of intake, being often co-administered with benzodiazepines (BDZs) during the first weeks in order to obtain a short-term relief feeling. BDZs are the preferred psychiatric drugs for the treatment of anxiety, being often related to crimes facilitated by drugs, such as robbery, rape and fraudulent games, as well with road accidents. They are frequently used in suicide attempts, in relieving anxiety or insomnia caused by drugs of abuse as methamphetamines, opiates, cocaine or alcohol, possibly having an additive effect when taken concomitantly. Currently the high consumption of drugs of abuse and pharmaceuticals is transversal to different sectors of society, putting concerns that justify the existence of monitoring techniques. Blood and urine are the conventional biological samples for the determination of drug exposure, but in the last years there has been an increasing interest in the use of other biological matrices. Hair is a biological matrix of noninvasive collection, whose analysis allows the detection of trace chemicals consumed even after its complete excretion of the body, allowing establishing profiles of exposure to xenobiotics, from weeks to years. This study focused on the development and validation of an analytical methodology for the detection and quantification of psychiatric drugs in human hair using liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry (LC-MS/MS). The psychiatric drugs under study were venlafaxine, imipramine, fluoxetine, agomelatine, diazepam and the main metabolite of alprazolam, alpha-hydroxy-alprazolam. In a first phase of the work the conditions of separation, identification and quantification of target analytes were optimized. Retention time (tR), two transitions acquired by selective reaction monitoring (SRM) and the ion ratio among them were used for identification of the analytes. Quantification was performed using the internal standard (PI) method. The method was further validated by the evaluation of performance parameters such as linearity, working range, limit of detection, limit of quantification, repeatability, intermediate precision and accuracy. Finally, the developed methodology was applied to the quantification of the tested analytes in hair samples collected from patients chronically taking one or more of the selected psychiatric drugs.