Estudo da expressão génica da Legionella Pneumophila após cultura em acanthamoeba castellanii

Dissertação para obtenção do grau de Mestre em Microbiologia Médica

A Legionella pneumophila (Lp) é um microrganismo patogénico intracelular capaz de infectar protozoários e macrófagos alveolares. A transição do ambiente extracelular para o intracelular requer a activação de programas transcripcionais que coordenam a transição da Lp da fase replicativa para a fase transmissiva. Contudo, o conhecimento sobre os factores necessários para a proliferação intracelular e a adaptação a diferentes ambientes é ainda bastante escasso. Este trabalho teve como objectivos o estudo da expressão génica de Lp Paris antes e após infecção em Acanthamoeba castellanii (Ac), ao longo de um e dois ciclos de infecção de 24 h, e a compreensão da dinâmica de crescimento ao longo dos mesmos. Registaram-se baixas percentagens de internalização em Ac, tanto no início do primeiro como do segundo ciclo. Contudo, o número de microrganismos foi elevado no fim dos ciclos e a dinâmica de multiplicação intracelular durante o segundo ciclo aparenta ser menor do que no primeiro. O número de ciclos infecciosos não altera a sensibilidade da Lp ao sódio. Em relação à resistência ao choque osmótico, apenas a suspensão de inoculação demonstrou sinais de sensibilidade, ao contrário das suspensões resultantes do primeiro e segundo ciclo. Do estudo da expressão génica, concluiu-se que infecções realizadas com Lp em fase estacionária precoce e tardia apresentam padrões de modulação distintos. Durante os dois ciclos de 24 h com Lp em fase estacionária precoce e tardia, observou-se indução de 6 genes e repressão de 3, respectivamente. Porém, os níveis de expressão génica não se mantêm estáveis, apresentando variações entre ciclos. Até ao momento, desconhece-se o impacto da variação da expressão génica dos genes em análise sobre a virulência desta bactéria e nos eventuais processos de infecção do hospedeiro humano. Como tal, torna-se imperativo perceber qual a função destes genes e compreender qual o seu papel no processo de invasão.