Novas estratégias no combate à tuberculose: a NADH-MENAQUINONA desidrogenase do tipo II de Mycobacterium tuberculosis

Dissertação para obtenção do Grau de Mestre em Microbiologia Médica

A tuberculose continua a ser um problema de saúde mundial, reclamando milhões de vidas todos os anos. A emergência de estirpes Mycobacterium tuberculosis multi- e extensivamente resistentes aos fármacos e a ausência de opções terapêuticas tornam urgente o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas. O objectivo deste trabalho foi estudar a NADH-menaquinona desidrogenase do tipo II (NDH-2) de M. tuberculosis, uma enzima essencial na cadeia respiratória desta bactéria, considerada um alvo preferencial para o desenho de novos antibacilares. Pretende-se em particular compreender a relação entre a actividade de NDH-2 e a energia requerida pelos sistemas de efluxo, recentemente reconhecidos como elementos-chave na fase inicial do desenvolvimento de resistência aos compostos antimicrobianos. O gene ndh-2, que codifica para a enzima NDH-2 de M. tuberculosis, foi clonado em Mycobacterium smegmatis mc2155 e a estirpe transformada utilizada para sobre-expressar a proteína. As duas estirpes, selvagem e transformada, foram caracterizadas por determinação da concentração mínima inibitória (CMI) de antibióticos (isoniazida, rifampicina, etambutol, claritromicina, eritromicina, ofloxacina, canamicina, amicacina, gentamicina, capreomicina, tetraciclina) na presença de compostos conhecidos como inibidores de efluxo (IEs), nomeadamente tioridazina, clorpromazina, verapamil, flupentixol, haloperidol, ortovanadato, arilpiperazinas e carbonil cianeto m-clorofenilhidrazona. O IE haloperidol, seguido do flupentixol e verapamil, provocaram as maiores reduções de CMIs, principalmente para a claritromicina e eritromicina. Avaliou-se também a capacidade destes IEs para inibir o efluxo de brometo de etídio, tendo o verapamil apresentado o maior efeito inibitório. Por último, avaliou-se o efeito dos IE na actividade enzimática de NDH-2, por determinação da actividade de oxirredução de NADH-menaquinona de suspensões membranares das células com NDH-2 sobre-expressa. Os resultados obtidos mostram que a actividade enzimática de NDH-2 é mais afectada pela presença do flupentixol, haloperidol e verapamil, embora a diferentes molaridades. Os resultados obtidos indicam que NDH-2 é um alvo promissor para o desenvolvimento de novos compostos anti-tuberculose.

Fundação para a Ciência e a Tecnologia - PTDC/BIA-MIC/121859/2010