Estudo dos genes DICER1 e C8orf48 em formas familiares de bócio multinodular e cancro da tiróide

Dissertação para obtenção do Grau de Mestre em Genética Molecular e Biomedicina

As formas familiares de carcinomas não-medulares da tiróide (FNMTC) representam 5% das neoplasias que ocorrem na glândula tiroideia. Até à data, foram mapeados oito loci de susceptibilidade para o FNMTC, no entanto, apenas o gene de susceptibilidade DICER1, localizado no cromossoma 14q31, foi identificado. Este gene encontra-se também mutado em formas familiares de bócio multinodular (FMNG). Este trabalho teve como objectivo investigar o papel do gene DICER1 na etiologia de lesões tiroideias, em famílias com FMNG, FNMTC, e em famílias com casos de carcinomas não-medulares da tiróide e/ou de bócio multinodular. Nestas famílias, identificaram-se sete polimorfismos intrónicos no gene DICER1, cinco dos quais estavam localizados numa região de microssatélites. Em suma, os resultados deste estudo sugerem que não são frequentes as mutações nas regiões codificantes do gene DICER1 em lesões benignas e carcinomas familiares da tiróide. Neste projecto, pretendeu-se ainda estudar a nível funcional a variante c.65C>T (p.T22I) do gene C8orf48 (localizado no locus 8p23.1-p22), identificada através da sequenciação global do exoma (WES), num doente de uma família Portuguesa com FNMTC. Para o estudo funcional da variante c.65C>T, construiu-se um plasmídeo pcDNA3NeoMyc que expressava o gene C8orf48 wild type e outro que expressava o gene C8orf48 com a variante c.65C>T. Após a construção dos plasmídeos, procedeu-se à transfecção transiente de células de carcinoma papilar da tiróide humano (linha celular TPC-1) com os plasmídeos referidos anteriormente e com o plasmídeo sem o gene C8orf48, e realizaram-se ensaios de viabilidade celular. Nestes ensaios, não se observaram diferenças estatisticamente significativas na viabilidade das células transfectadas com os diferentes plasmídeos, possivelmente devido a uma reduzida eficiência de transfecção, que poderá ser ultrapassada pela utilização de células com expressão estável dos plasmídeos. O presente projecto constituiu a primeira etapa na identificação e caracterização de alterações na sequência dos genes DICER1 e C8orf48, respectivamente. Novos estudos moleculares e celulares serão necessários para esclarecer o papel destes genes na tumorigénese da tiróide.