Rastreamento de mutações somáticas do gene EGFR de pacientes com CPNPC

Dissertação para a obtenção do Grau de Mestre em Genética Molecular e Biomedicina

O cancro do pulmão é a causa de morte responsável por um terço das mortes provocadas por cancro em todo o mundo. Mutações somáticas localizadas nos exões 18-21 do gene do recetor do fator de crescimento epidérmico (EGFR) têm sido associadas a pacientes com cancro do pulmão de não pequenas células (CPNPC). Estas mutações induzem a ativação constitutiva do domínio de tirosina quinase (TK) do recetor transmembranar e atribuem sensibilidade aos fármacos inibidores da TK gefitinib e erlotinib, enquanto as mutações no exão 20 conferem resistência. O rastreamento de mutações somáticas no gene EGFR assume, assim, uma importância extrema na decisão do tratamento, quer para selecionar pacientes para o tratamento com inibidores da TK, quer para identificar resistência a estes inibidores. Foram utilizadas 3 amostras diferentes para o desenvolvimento e validação deste trabalho: a) Sangue conservado em Indicating FTA Micro Card para amplificação por PCR convencional e Multiplex; b) gDNA com a mutação E746_A750 ao nível do exão 19 para a determinação do limite de deteção de ambas as técnicas e; c) Amostras FFPE que simulam 20 pacientes para o rastreamento de mutações somáticas no gene EGFR. Os protocolos de amplificação e sequenciação desenvolvidos neste trabalho permitiram o rastreamento 20 amostram FFPE estudadas. Destas, apenas se obteve 1 falso positivo e duas amostras apresentaram má qualidade do DNA, pelo que não houve amplificação do material genético. A amplificação por PCR Multiplex foi testada em 4 amostras FFPE contendo mutações em pelo menos 1 exão, no entanto a mutação G719A não foi detetada. O trabalho desenvolvido permitiu a validação analítica dos protocolos desenvolvidos neste estudo eficaz, embora ainda seja necessário otimizar o protocolo de amplificação por PCR Multiplex e validar os restantes parâmetros de qualidade de modo a integrar este serviço nos laboratórios da STAB VIDA.