Caracterização cariológica do fungo Hemileia vastatrix responsável pela ferrugem alaranjada do cafeeiro

Dissertação para obtenção do Grau de Mestre em Biotecnologia

A ferrugem alaranjada é a doença mais importante do cafeeiro Arábica (Coffea arabica), provocada pelo fungo Hemileia vastatrix. As quebras na produção de café e os prejuízos económicos tornam essencial o conhecimento da biologia deste fungo, para posterior compreensão das interacções estabelecidas entre este e o cafeeiro. Este trabalho teve como principal objectivo o estabelecimento do cariótipo de H. vastatrix. Foram utilizados dois isolados pertencentes a raças distintas 1065 (raça II) e 71 (raça VI) e duas técnicas complementares: uma citológica e outra electroforética. A primeira baseou-se no método do rebentamento dos tubos germinativos, de forma a libertar os núcleos do interior dos tubos e, após optimização, permitiu estimar um número de cromossomas entre sete e 14 para o isolado 71. A segunda utilizou a electroforese em gel de campo pulsado, sendo que a principal limitação à aplicação desta técnica passou pela produção de protoplastos em número suficiente, essencial na obtenção de cromossomas intactos. Para ultrapassar esta restrição foi testado um protocolo alternativo que conduziu a um resultado positivo, tendo sido possível observar um padrão electroforético para os dois isolados, mas que ainda assim necessita de optimização. Por último foi implementada a técnica de hibridação in situ por fluorescência para núcleos de H. vastatrix que permitiu a identificação de rDNA em núcleos interfásicos dos dois isolados. As técnicas executadas neste trabalho foram aplicadas pela primeira vez a H. vastatrix e contribuirão para uma futura determinação do número de cromossomas de diferentes isolados de raças distintas, com o objectivo de ligar a patogenicidade de cada raça a polimorfismos ao nível do genoma.

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