Caracterização de estirpes de Mycobacterium bovis: estudos de crescimento e de interacção com macrófagos

Dissertação para obtenção do Grau de Mestre em Genética Molecular e Biomedicina

Mycobacterium bovis é o principal agente etiológico da tuberculose bovina, uma zoonose com elevada relevância a nível mundial. Uma vez no hospedeiro, M. bovis tem a capacidade de sobreviver e de se multiplicar no interior dos macrófagos, sendo a interacção entre a micobactéria e a célula hospedeira determinante no estabelecimento da infecção. Neste trabalho foram estudadas duas estirpes de M. bovis epidemiologicamente relevantes: LNIV 11428/003/05 (SB0121) e LNIV 7407/000/04 (SB1175), na perspectiva de avaliar se a diferente frequência e dispersão dos perfis de spoligotyping SB0121 e SB1175 pode ser devida ao diferente sucesso das estirpes enquanto agentes patogénicos. Determinaram-se as curvas de crescimento e estudou-se a resistência a intermediários reactivos de oxigénio e azoto, em meio de cultura. O crescimento intracelular em macrófagos e o efeito da infecção na produção de citocinas foi também estudado. Em meio de cultura, o crescimento avaliado pela contagem de colónias foi idêntico para as duas estirpes. Contudo, pela leitura da densidade óptica, a estirpe LNIV 11428/003/05 apresentou uma taxa de crescimento 1,3 vezes superior. Esta estirpe mostrou também uma maior resistência ao peróxido de hidrogénio, e curiosamente, na presença de nitrito de sódio, para concentrações de 4 e 8 mM, apresentou uma maior susceptibilidade. A estirpe LNIV 11428/003/05 cresceu significativamente melhor nos macrófagos. Entre as 6 e as 24 horas após a infecção, a produção de TNF-α aumentou na infecção com a estirpe LNIV 11428/003/05, mas manteve-se idêntica com a estirpe LNIV 7407/000/04. Embora preliminares, estes resultados sugerem que a elevada prevalência e ampla distribuição geográfica do spoligotipo SB0121 em Portugal pode estar relacionada com uma maior capacidade de sobrevivência e crescimento destas estirpes nos macrófagos. Este estudo contribui para o conhecimento de um importante agente patogénico, e deve ser continuado com vista a compreender e justificar os resultados observados.