Preparação e caracterização de nanocompósitos de nanopartículas metálicas com proteínas e suas aplicações em biossensores

Dissertação apresentada na Faculdade de Ciências e Tecnologia da Universidade Nova de Lisboa para obtenção do grau de Mestre em Engenharia Microelectrónica e Nanotecnologias

Este trabalho consistiu no desenvolvimento de um biossensor enzimático para determinação de fenóis. A tirosinase (TYR (EC 1.14.18.1)), proveniente de Agaricus bisporus, é uma enzima que catalisa a oxidação de compostos mono e di-fenólicos para as suas correspondentes quinonas, sendo interessante o seu uso, como base de um sensor enzimático para a detecção de compostos fenólicos. Assim, desenvolveu-se um biossensor baseado na TYR e em AuNP, recorrendo a duas estratégias: o método Layer-by-layer (depositando camadas alternadas de enzima e AuNP) e deposição de uma camada de bionanoconjugados. Estas camadas foram comparadas com enzima apenas. Para este efeito, foram caracterizadas AuNP esféricas funcionalizadas com o péptido CALNN, assim como os respectivos bionanoconjugados com TYR, em termos das propriedades relevantes para a construção de sensores, determinando os parâmetros óptimos para a sua utilização na construção de um biossensor. Foram preparados por Layer-by-layer AuNP esféricas funcionalizadas com o péptido CALNN e TYR e foi também depositada uma monocamada de bionanoconjugados, tendo-se observado actividade enzimática em ambos os casos. Os processos foram optimizados e os depósitos de bionanoconjugados caracterizados por Elipsometria Espectroscópica e AFM. A VC foi utilizada para caracterizar os biossensores de bionanoconjugados preparados e determinar a sua viabilidade como biossensores electroquímicos de compostos fenólicos.