Comparação de métodos para identificação de bactérias filamentosas responsáveis pelo fenómeno de bulking numa ETAR

Dissertação apresentada na Faculdade de Ciências e Tecnologia da Universidade Nova de Lisboa para obtenção do Grau de Mestre em Engenharia do Ambiente – Perfil Engenharia Sanitária

No tratamento secundário de águas residuais, o processo de lamas activadas é o actualmente mais utilizado. Este tratamento assenta no crescimento de bactérias formadoras de flocos que se separam por gravidade do sobrenadante clarificado, sendo indispensável para este processo uma boa floculação consequência de um crescimento equilibrado entre estas bactérias e as bactérias filamentosas. Quando existe um crescimento excessivo destas últimas verifica-se um fenómeno indesejado designado de bulking filamentoso. O presente trabalho teve como principal objectivo a comparação de diferentes métodos para identificação de bactérias filamentosas de uma ETAR com um sistema de tratamento de lamas activadas, nomeadamente através de uma observação microscópica clássica (amostra bruta e amostra corada) utilizando colorações de Gram, de hematoxilina e eosina e aplicação dos métodos API e MALDI-TOF. Através da observação microscópica das amostras coradas com hematoxilina e eosina foi possível verificar que estavam presentes pelo menos dois tipos de microrganismos. Obtiveram-se igualmente os mesmos resultados com a aplicação da coloração de Gram, tendo os microrganismos presentes sido classificados de Gram negativos. Relativamente à aplicação do kit API 20 E, foram identificados os géneros Serratia e Enterobacter. No entanto, não foi possível obter a identificação ao nível da espécie predominante na amostra. Através da aplicação do método MALDI-TOF-MS, tornou-se possível a identificação de proteínas correspondentes ao género Serratia sp., género Enterobacter sp., espécie Peptostreptococcus anaerobius, género Geobacter sp., espécie Escherichia coli e espécie Syntrophus aciditrophicus. A principal razão para não ter sido possível uma identificação ao nível da espécie do microrganismo filamentoso predominante esteve relacionada com o facto de não ter sido possível obter uma amostra pura dentro do tempo da realização das experiências. Possivelmente, o meio de cultura escolhido não foi suficientemente selectivo potenciando o crescimento de outras espécies presentes. Relativamente aos métodos testados concluiu-se que através da observação microscópica utilizando colorações de Gram e hematoxilina e eosina, são fáceis e rápidos de aplicar podendo ser utilizados na identificação rotineira dos organismos presentes numa ETAR.