Tolerância à vancomicina em Enterococcus faecalis: papel de proteínas hipotéticas

Dissertação apresentada para a obtenção do Grau de Mestre em Genética Molecular e Biomedicina, pela Universidade Nova de Lisboa, Faculdade de Ciências e Tecnologia

Enterococcus faecalis é um agente patogénico oportunista e um dos principais responsáveis por infecções nosocomiais. A sua virulência é multifactorial e ainda pouco compreendida. 36 % do genoma de E. faecalis V583 está anotado como genes que codificam proteínas hipotéticas ou de função desconhecida (PHFD). Estudos de transcriptómica têm sugerido a implicação destes genes na resposta a vários stresses em E. faecalis. No entanto, não têm existido muitas tentativas para atribuir uma função a estes genes. Num estudo efectuado anteriormente com V583 submetido a uma dose terapêutica de vancomicina (10 μg.mL-1) observou-se que 50 % dos genes cuja transcrição foi afectada codificam para PHFD. No presente estudo, seleccionaram-se alguns destes genes (EF0802, EF1231, EF1813, EF2292 e EF2896) que apresentaram um aumento mais marcante nos níveis de expressão. Os resultados dos microarrays para os genes referidos foram confirmados por RT-PCR semi-quantitativo, mais uma vez sugerindo um papel para estes genes na resposta de E. faecalis à vancomicina. Procedeu-se à expressão das proteínas hipotéticas codificadas por aqueles genes em E. coli e à construção de mutantes. Estes mutantes encontram-se em fases diferentes de construção e até ao momento foi possível obter o mutante do EF2292. Este não revelou alterações no fenótipo de resistência à vancomicina, comportando-se de forma idêntica à estirpe selvagem. Quanto à expressão das proteínas hipotéticas EF1231 e EF2292, está em curso a optimização das condições para purificação e obtenção da sua estrutura. Este trabalho constitui um passo no sentido de tornar conhecido o que é ainda desconhecido no genoma e comportamento de E. faecalis.