Estudo dos principais mecanismos de resistência aos antibióticos β-lactâmicos em bactérias patogénicas de gram negativo

Dissertação apresentada para a obtenção do Grau de Mestre em Genética Molecular e Biomedicina, pela Universidade Nova de Lisboa, Faculdade de Ciências e Tecnologia

A resistência aos antibióticos é um problema global e emergente, sendo as β-lactamases o principal mecanismo de resistência bacteriana aos antibióticos β-lactâmicos em bactérias de Gram negativo. O principal objectivo deste trabalho consistiu em avaliar a diversidade das β-lactamases produzidas por um grupo de 126 bactérias de Gram negativo,isoladas no período de 2004 a 2008 em diversos ambientes clínicos, em particular as β-lactamases de espectro alargado (ESBL), AmpC e carbapenemases. O teste de susceptibilidade aos antibióticos, permitiu determinar a expressão fenotípica das β-lactamases produzidas pelos isolados em estudo e dirigiu ainda a pesquisa molecular dos genes que codificam essas enzimas, os genes bla, de acordo com esse fenótipo. As β-lactamases ESBL, identificadas por sequenciação nucleotídica daqueles genes e análise bioinformática, eram da família TEM (TEM-10, TEM-24 e TEM-52), SHV (SHV-12), CTXM (CTX-M-1, CTX-M-9, CTX-M-14, CTX-M-15 e CTX-M-32) e GES-1, sendo CTX-M-15 as enzimas mais comuns. Entre o total de isolados estudados 81 eram produtores desta enzima CTX-M-15, encontrando-se disseminada entre as várias espécies, provenientes de várias regiões do país o que, associado a dados anteriores, sugere a sua disseminação crescente,eventualmente clonal, nomeadamente a nível hospitalar. Aí verificou-se existir disseminada por vários serviços. Entre as β-lactamases de classe A de Ambler, foram ainda detectadas as penicilinases SHV-1, TEM-1 e SHV-28, estando relacionadas com falsos fenótipos ESBL identificados, devido a provável hiperprodução. A caracterização bioquímica de β-lactamases AmpC cromossómicas, realizada por focagem isoeléctrica, permitiu confirmar a expressão destas enzimas, tendo sido verificado que as estirpes de Pseudomonas, Citrobacter e Enterobacter spp co-produziam ainda β- lactamases CTX-M-14, CTX-M-15, SHV e TEM-tipo, focalizando em pIs pré-definidos. Entre as β-lactamases de classe C, foram ainda detectadas as AmpC plasmídicas DHA-1 e CMY-2, nunca antes descritas em Portugal. A avaliação dos parâmetros cinéticos para a nova enzima, SHV-99, revelou uma maior afinidade (Km) para as penicilinas, cefalosporinas de terceira geração e aztreonam, o que nos leva a sugerir que substituições aminoacídicas na posição 104 de Ambler podem estar envolvidas no reconhecimento e discriminação dos substratos.Em conclusão, a co-expressão frequente de duas ou mais β-lactamases nos isolados deste estudo, a diversidade de famílias de β-lactamases identificadas, nomeadamente em diferentes espécies, e a resistência a diferentes antibióticos β-lactâmicos que lhes está associada, partilhando sobretudo fenótipos de multirresistência, constitui um panorama preocupante que interessa valorizar em termos de saúde pública