Validação do método de deteção de eritropoietina recombinante humana em urina humana por focalização isoelétrica

A eritropoietina (EPO) é uma substância que estimula a produção de eritrócitos, aumentando a oxigenação muscular, sendo segregada de forma natural pelo organismo e excretada na urina em baixas concentrações. Devido às suas propriedades e características, a EPO foi rapidamente introduzida no mundo do desporto, como substância ilícita, proporcionando vantagens no rendimento desportivo. No início de 2000 foi desenvolvido um método de deteção direta de EPO Recombinante (rHuEPO) em urina humana por Lasne, baseado na focalização isoelétrica (IEF) em gel de poliacrilamida, seguido de duplo blote, tendo este sido publicado e validado. Em 2002, a Agência Mundial Antidopagem (AMA) implementou este mesmo método, sendo atualmente um dos métodos oficiais utilizado pelos laboratórios acreditados pela AMA. Desta forma, o ponto de partida para a realização deste trabalho consistiu na necessidade de implementar e validar o método de referência de IEF para a deteção de rHuEPO em urina humana. O trabalho foi realizado no Laboratório de Análises e Dopagem (LAD) do Instituto do Desporto de Portugal (IDP), atual Instituto Português do Desporto e Juventude (IPDJ). O principal objetivo deste trabalho consistiu no estudo/investigação de diferentes parâmetros de validação (especificidade/seletividade; capacidade de identificação; limite de deteção; exatidão e repetibilidade), de acordo com o protocolado no Procedimento Geral interno do Laboratório de Análises de Dopagem de Lisboa (LAD). O referido método de triagem e confirmação revelou possuir características de desempenho conformes com os requisitos aplicáveis, pelo que é considerado validado e apto.

ABSTRACT - Erythropoietin (EPO) is a substance that stimulates red blood cell production, increasing muscle oxygenation and is secreted naturally by the body and excreted in urine in low concentrations. Due to the special properties of EPO, this was quickly introduced into the world of sport and its illicit use provides advantages in sports performance. In early 2000, was developed a method for direct detection of erythropoietin (EPO) on recombinant human urine by Lasne, based on isoelectric focusing (IEF) in polyacrylamide gel, followed by double blotting, has been published and validated. In 2002, the World Anti-Doping Agency (WADA) has implemented this same method which is currently the only official method used by laboratories accredited by WADA. The starting point for this work was the need to implement and validate the reference method, for the detection of recombinant erythropoietin in human urine. The study was conducted at the Laboratory for Doping Analysis and (LAD) of the Sports Institute of Portugal (IDP), current IPDJ. The objective of the work focused on validation studies/investigation of different validation parameters (specificity/selectivity; ability identification, detection limit, accuracy and repeatability), according the protocol Procedimento Geral Interno of the Antidoping Laboratory of Lisbon. This method of screening and confirmation has revealed performance characteristics in accordance with the applicable requirements for what is considered valid and fit.