Desenvolvimento e procedimentos de validação de uma metodologia analítica por GC/MS/MS para a determinação de antidepressivos em sangue total

A depressão é uma das doenças de foro psiquiátrico que mais prevalece na nossa sociedade, subsistindo evidências epidemiológicas que indicam um aumento substancial da sua incidência nos últimos anos. Esta evidência é consubstanciada pelo aumento significativo do consumo de antidepressivos em Portugal. Este cenário pressupõe a necessidade de uma metodologia que permita analisar, com rigor e numa perspectiva de rotina, os antidepressivos que podem ser encontrados em amostras de sangue. No contexto do Serviço de Toxicologia Forense do Instituto Nacional de Medicina Legal, Delegação do Norte, torna-se necessário o desenvolvimento de uma metodologia analítica para a determinação simultânea de 15 antidepressivos em sangue total e a sua validação relativamente a vários parâmetros analíticos. Os antidepressivos considerados foram Amitriptilina, Citalopram, Clomipramina, N-Desmetilclomipramina, Dotiepina, Fluoxetina, Imipramina, Maprotilina, Mianserina, Mirtazapina, Nortriptilina, Paroxetina, Sertralina, Trimipramina e Venlafaxina. A técnica utilizada para este efeito foi o GC/MS/MS, aplicando um procedimento extractivo prévio apropriado, baseado em procedimentos convencionais de extracção em fase sólida. A escolha desta técnica teve por base a possibilidade de identificar inequivocamente os compostos presentes na amostra, independentemente da complexidade da matriz, e de originar metodologias com uma sensibilidade elevada e com limites de detecção muito baixos. Os parâmetros analíticos considerados para validação da metodologia estabelecida foram selectividade/especificidade e capacidade de identificação; limites de detecção e de quantificação; linearidade e gama de trabalho; eficiência de extracção; arrastamento; exactidão (precisão, veracidade e incerteza de medição) e robustez. Com excepção da exactidão, um parâmetro que carece ainda de estudos complementares, todos os parâmetros estudados foram validados de acordo com os requisitos internos do Serviço. De uma forma geral, os resultados obtidos com o método desenvolvido revelaram-se selectivos e apresentaram respostas analíticas tanto para concentrações de antidepressivos em níveis terapêuticos como para níveis letais destas drogas. Os procedimentos extractivos revelaram-se eficazes e não foram verificados fenómenos de arrastamento em concentrações mais elevadas. O método foi ainda considerado robusto.

Depression is one of the most prevalent psychiatric disorders in our society. Solid epidemiological evidence suggests a substantial incidence of the disease in recent years. This is supported by a significant increase in the consumption of antidepressant drugs, creating the need of suitable methods for their accurate analysis in blood samples, carried out in a routine fashion. Focusing the needs of the Serviço de Toxicologia Forense do Instituto Nacional de Medicina Legal, Delegação do Norte, it is important to develop an analytical methodology for the simultaneous determination of 15 antidepressant drugs in whole blood and to validate it with regard to several analytical parameters. The selected antidepressants are Amitriptyline, Citalopram, Clomipramine, N-Desmethylclomipramine, Dothiepin, Fluoxetine, Imipramine, Maprotiline, Mianserine, Mirtazapine, Nortriptyline, Paroxetine, Sertraline, Trimipramine e Venlafaxine. GC/MS/MS was selected for this purpose, after carrying out suitable pre-treating solid-phase extraction procedures. This selection was grounded on the fact that the identification of every compound is ensured and the resulting method offers high sensitivity with low limits of detection. The analytical parameters required for validation included selectivity/specificity and identification capability; limits of detection and quantification; linearity and working concentration range; extraction efficiency; carryover; accuracy (precision, trueness and uncertainty); and robustness. Excluding accuracy that still needs additional testing, all parameters were validated according to the requisites of the Serviço de Toxicologia Forense do Instituto Nacional de Medicina Legal, Delegação do Norte. In general, the obtained results offered good selectivity and analytical responses for the typical concentration ranges of therapeutic and lethal levels. The extraction procedures were effective and no carryover was observed for the highest concentrations. The overall method was found robust.