Análogos do neuropéptido Y marcados com 99mTc para detecção de receptores Y1 expressos no cancro da mama

Mestrado em Medicina Nuclear. Área de especialização: Radiofarmácia.

O cancro da mama constitui uma das neoplasias mais frequentes, sendo por isso necessário melhorar as técnicas de imagem existentes, para um diagnóstico eficaz. Os tumores sobreexpressam frequentemente receptores que permitem o seu alvejamento específico por radiopéptidos. Os receptores do neuropéptido Y (NPY) encontram-se entre os mais promissores candidatos, tornando-se alvos potencialmente úteis para imagem e terapia. O cancro da mama, em particular, apresenta uma elevada incidência e densidade na expressão destes receptores, especificamente do subtipo Y1. Um dos grandes desafios da radiofarmácia consiste, assim, na marcação de análogos do NPY com 99mTc, para visualização do receptor Y1. O objectivo deste trabalho consistiu em sintetizar e caracterizar química e radioquimicamente dois análogos do NPY (um curto e um longo), marcados com 99mTc e respectiva avaliação biológica, em modelos tumorais de carcinoma da mama. A síntese do análogo longo foi efectuada por síntese de péptidos em fase sólida (SPPS) automática, com irradiação de microondas e o crude peptídico obtido foi caracterizado por HPLC e espectrometria de massa. Os resultados demonstraram que a síntese não foi bem-sucedida. A expressão do receptor Y1 foi avaliada, por western blot, em várias linhas celulares tumorais, tendo-se verificado elevada expressão do receptor em várias dessas linhas, em particular nas células MDA-MB-231 e MDA-MB-435S, de cancro da mama. Não foi possível efectuar a marcação e avaliação biológica dos análogos do NPY. No entanto, resultados anteriores efectuados com o radiopéptido curto 99mTc-pz-Glu-NPY1 demonstram uma baixa internalização celular (em células MCF-7 de cancro da mama), sugerindo um eventual comportamento antagonista, que deverá ser averiguado. - ABSTRACT - Breast cancer is one of the most common cancers and therefore, there is a need to improve existing imaging techniques for effective diagnosis. The tumors frequently overexpress receptors that allow its specific targeting by radiopeptides. Neuropeptide Y (NPY) receptors are among the most promising candidates, making it potentially useful for imaging and therapy. Breast cancer, in particular, shows a high incidence and density in expression of these receptors, specifically Y1 subtype. One of the great challenges of radiopharmacy consists therefore in radiolabeling NPY analogues with 99mTc, for Y1-receptor targeting. The aim of this work was to prepare and perform radiochemical and chemical characterization of two analogues of NPY (one short and one long), labeled with 99mTc and its biological evaluation in tumor models of breast cancer. Synthesis of the long analogue was achieved by automated solid phase peptide synthesis (SPPS), using microwave irradiation and the crude peptide obtained was characterized by HPLC and mass spectrometry. The results demonstrate that synthesis was not successful. The Y1-receptor expression has been evaluated by western blot in several tumor cell lines and it was found a higher intensity of receptor expression in MDA-MB-231 and MDA-MB-435S breast cancer cells. The radiolabeling and biological evaluation of NPY analogues was not possible. However, previous results with the short analogue 99mTc-pz-Glu-NPY1 showed a low cell internalization (in MCF-7 breast cancer cells), suggesting an antagonist behavior for the radiopeptide, which should be investigated.