利用基因枪和电穿孔仪将外源DNA转入中国对虾的初步研究

首次用基因枪的方法，以绿色荧光蛋白基因作为报告基因，和带有切割对虾白斑病病毒基因的核酶基因质粒pG DNA－RZ1导入中国对虾受精卵中，利用荧光显微镜分别对各个不同发育时期对虾幼体的处理组和对照组作了检测。绿色荧光蛋白在元节幼体和蚤状幼体中的瞬间表达强烈。用GFP引物对28尾经转基因处理过的中国对虾幼虾和次成虾做了PCR检测，有17尾显示阳性结果，PCR产物为700bp长度的片段，与阳性对照结果及GFP基因的长度一致。阴性对照未见上述片段。阳性率为60.7％。同时对中国对虾进行RT－PCR检测，结果也得到了与PCR检测大小一致的扩增片段，证实了外源基因的成功导入和表达。首次获得了转基因表达的中国对虾成体。利用电穿孔仪对中国对虾的转基因实验表明：电穿孔仪能够将外源基因导入中国对虾受精卵，并可观察到在处理的幼体中存在绿色荧光。在不同的脉冲电场电压下，虾卵的孵化情况有很大差异。虾卵的孵化率和脉冲持续时间呈负相关的关系。荧光显微镜对各处理组的无节幼体的镜检结果表明，能够明显显示绿色荧光的幼体十分少。在相对高压和短脉冲时间条件下，只得到个别幼体其绿色荧光强度明显强于对照组，但此时卵化率极低。本研究初步建立了转基因虾的操作方法。为今后虾类基因工程育种在生产实践中的应用奠定了实验基础。