弧菌琼胶酶和丝氨酸蛋白酶的筛选、分析以及免疫应用
Data(s) |
21/05/2009
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Resumo |
从山东黄岛海水养殖场分离到一株弧菌V134,从中克隆得到琼胶酶基因agaV,并将其在大肠杆菌中表达,纯化得到重组的琼胶酶AgaV。酶活分析发现该琼胶酶的最适温度在40℃左右,对pH比较敏感,pH 7.0时具有最高的琼胶裂解活性。对AgaV进行了两种应用性探索:(1)利用AgaV从琼脂糖凝胶中回收DNA,回收效率可达90%以上;(2)利用agaV作为报告基因构建了捕获分泌序列的载体pBU,并用其从革兰氏阳性细菌(G+菌)和革兰氏阴性细菌(G-菌)中筛选出了一系列分泌蛋白。将利用pBU从一株哈维氏弧菌T4中筛选出的6个分泌蛋白分别进行基因克隆、蛋白表达纯化和牙鲆免疫实验,发现其中一个蛋白,命名为DegQVh,具有免疫保护效应,其免疫保护率(RPS)可达64%。为了提高DegQVh的免疫保护效应,将AgaV的分泌结构域与DegQVh融合,构成融合抗原AgaV-DegQVh。利用大肠杆菌作为载体菌构建了AgaV-DegQVh融合抗原递呈系统,用其作为疫苗进行免疫,发现其RPS可达到95%。酶活分析表明DegQVh在50℃、pH 8.0时具有最高的活性。突变分析表明83位的组氨酸、113位的天冬氨酸和188位的丝氨酸以及两个PDZ结构域是DegQVh活性所必需的。表达分析发现degQVh表达受温度和细胞浓度调控,并且其上游有一个受E调控的启动子。进一步的分析发现DegQVh能够与大肠杆菌的DegP功能互补。 |
Identificador | |
Idioma(s) |
中文 |
Fonte |
弧菌琼胶酶和丝氨酸蛋白酶的筛选、分析以及免疫应用.张卫卫[d].中国科学院海洋研究所,2009.20-25 |
Palavras-Chave | #琼胶酶 #丝氨酸蛋白酶 #分泌序列 #牙鲆 #病原菌 |
Tipo |
学位论文 |