编码四种甲壳动物蜕皮抑制激素的部分cDNA的克隆和序列分析

本文分别提取了中国对虾、中华绒螯蟹、鹰爪虾和蓝对虾的眼柄总RNA。用无DNA污染的眼柄总RNA为模板，根据日本对虾的MIH设计兼并引物P1和P2，进行RT－PCR扩增，在适宜的反应条件下，均分别得到一特异性的产物。以蓝对虾基因组DNA为模板的PCR扩增也能得到一与特异性cDNA片段大小相似的特异性的DNA片段。分别将这些片段亚克隆到载体中进行测序，测得中国对虾特异性cDNA片段由203个碱基组成，中华绒螯蟹、鹰爪虾、蓝对虾的特异性cDNA片段及蓝对虾的特异性DNA片段由215个碱基组成，其中蓝对虾特异性cDNA与由蓝对虾的基因组DNA扩增得到的特异性DNA片段的碱基序列几乎完全相同。利用互联网上的在线工具Fasta3查找这些cDNA推定的氨基酸序列的相似序列，可以发现大量的甲壳动物的CHH家族的神经肽与它们相似。在所有的相似序列中，分别由中国对虾、中华绒螯蟹、鹰爪虾和蓝对虾的特异性cDNA片段推定的氨基酸序列与蜕皮抑制激素（MIH）的相似度最高，这一结果提示分别由中国对虾、中华绒螯蟹、鹰爪虾和蓝对虾的眼柄特异性cDNA片段推定的氨基酸序列可能是这四种甲壳动物的MIH片段。根据核苷酸数据和氨基酸数据，比较这四种甲壳动物的MIH以及已发表的六种MIH之间的相似度，同时分析这十种MIH的系统进化关系，结果是蓝对虾、鹰爪虾和中华绒螯蟹的MIH相似性较高，亲缘关系较近，这与物种的系统演化不相符。