鳗弧菌rpoS功能的研究

rpoS 基因编码RpoS因子（RNA聚合酶的σ亚基），能增强细菌细胞对外界不良环境的抗逆性和适应能力。我们从鳗弧菌（Vibrio anguillarum）M3 Fosmid 文库中得到rpoS 基因序列，全长999bp，同源分析发现与大肠杆菌（Escherichia coli）有71%的相似性，与霍乱弧菌（Vibrio cholerae ）有78%的相似性。为了研究rpoS在鳗弧菌中的作用，我们利用in-frame deletion技术构建了rpoS 基因的非极性缺失突变株，同时利用细菌的接合转移，以低拷贝克隆质粒pSUP202为载体，构建了突变株的互补株。 在TSB培养基中，rpoS 基因的缺失减缓了鳗弧菌对数期的生长，但是对稳定期的生长没有影响。对数期鳗弧菌在1M蔗糖（渗透压胁迫）和5%（v/v）乙醇中的生长减缓，而在18%(v/v)乙醇中的生长及42℃热击时的存活率相对于野生型没有变化。不同生长时期的鳗弧菌对15mM H2O2的反应有所不同，rpoS 的缺失使对数期的鳗弧菌对15mM H2O2的反应更加敏感。在rpoS基因互补株中，上述表型几乎恢复到野生型水平。 我们通过感染实验发现，rpoS 基因的缺失使鳗弧菌的LD50提高了20倍。 RpoS的突变对鳗弧菌的泳动和胞外酶的产生也有影响。突变株泳动圈直径是野生型的73.8%，在明胶平板和酪蛋白平板上的透明圈直径分别为野生型的61%和69%。通过azocaseion检测胞外产物ECP酶活发现，突变株的酶活是野生型的35.5%。 以上数据表明了RpoS在鳗弧菌对数期应对外界不良环境时起到了重要作用，同时参与了鳗弧菌的致病过程。