裂殖酵母PI4P5K基因的分离及功能解析

磷脂酰肌醇4-磷酸5-激酶（PI4P5K）催化磷脂酰肌醇4-磷酸（PI4P）的磷酸化产生磷脂酰肌醇4，5二磷酸（PI（4，5）P_2），后者参与很多细胞内信号传递。本实验应用化学致畸方法使裂殖酵母随机突变，筛选出its3突变株，该突变株具有温度敏感及免疫抑制剂FK506敏感的突变表型。通过将裂殖酵母基因文库转化至its3突变株内，根据表型互补性原理分离出its3~+基因。序列分析证明在裂殖酵母中its3~+基因编码PI4P5K。同时得出其功能与小鼠及出芽酵母中的PI4P5K相同，证明在裂殖酵母中its3基因产生为PI4P5K。将its3~+基因人为特异破坏后裂殖酵母细胞不能生存，说明在裂殖酵母中PI4P5K基因是必须基因，但其在信号传递系统中的具体作用机制还有特进一步阐明。对its3突变株中基因突变点确定显示其中一寡核苷酸G突变为A，从而导致编码蛋白第280位甘氨酸变异为天门冬氨酸。its3基因突变导致裂殖酵母细胞具有温度及FK506敏感性，FK506为Calcineurin特异抑制剂，因此可以说明its3~+基因产生参与外界温度及Calcineurin中介的信号传递。