N-(间硝基苯磺酰)-6-甲基吲哚体外抗HIV 活性及作用机制研究

本论文对12个N-（取代苯磺酰）吲哚类化合物体外抗HIV活性进行了初步筛选，并选择其中活性最好的化合物N-（间硝基苯磺酰）-6-甲基吲哚，对其抗HIV 活性及作用机制进行深入研究。一、体外检测了12个N-（取代苯磺酰）吲哚类化合物对C8166和MT-4细胞的毒性、对HIV-1IIIB 感染C8166后诱导的合胞体形成的抑制及对HIV-1IIIB感染MT-4 细胞后的保护作用。结果发现多个化合物具有抑制HIV-1复制活性，特别是化合物N-（间硝基苯磺酰）-6-甲基吲哚，其对HIV-1IIIB诱导的合胞体形成的EC50和TI （Therapy index）值分别为0.26 μg/ml和543.78；对HIV-1IIIB急性感染的MT-4细胞也有很好的保护作用（TI值为104.23)。二、选择活性最强的化合物N-（间硝基苯磺酰）-6-甲基吲哚进行深入的抗 HIV活性研究。在细胞水平上，通过观察致感染细胞病变和HIV-1 p24抗原表达抑制实验（ELISA方法），采用3类多株HIV病毒株（实验株、临床分离株、耐药株）和3类多种细胞（人T淋巴细胞传代株、HIV-1慢性感染人T淋巴细胞株、人外周血单个核细胞）对化合物进行体外抗HIV活性进行系统评价，实验结果表明，化合物对不同来源的HIV-1病毒株都显示出很好抗HIV活性。同时，我们也研究了化合物抗HIV-2活性，发现该化合物并不能抑制HIV-2在C8166细胞中复制。三、在细胞毒性实验上，我们检测了N-（间硝基苯磺酰）-6-甲基吲哚对不同的细胞系和人外周血单个核细胞（PBMC）毒性作用，结果显示化合物的细胞毒性较低。四、在作用机制和靶点研究上，检测了化合物对感染与未感染细胞之间融合的抑制、对HIV-1急性感染C8166细胞及对HIV-1慢性感染H9细胞（H9/HIV-1IIIB）中病毒复制的阻断作用。结果显示，N-（间硝基苯磺酰）-6-甲基吲哚对急性感染细胞有很好抑制作用（EC50为0.52 μg/ml）；但对感染与未感染细胞的融合（EC50为 46.40 μg/ml）和慢性感染H9细胞中病毒的复制没有抑制作用（EC50大于100 μg/ml）。提示化合物作用于HIV侵入细胞后到HIV DNA整合前这一阶段。其后对HIV-1逆转录酶活性的抑制情况进行了分析，发现N-（间硝基苯磺酰） -6-甲基吲哚对HIV-1逆转录酶（RT）有很好抑制作用。五、构效关系分析。我们对12 个N-（取代苯磺酰）吲哚类化合物进行了初步的构效关系研究，发现在N-benzenesulfonyl 环上连接一个吸电子基团(nitro group)比供电子基团(methyl group)有更强的抗HIV 活性，但当在indoles 环上连接吸电子基团(nitro group)，抗HIV 活性反而受到抑制。以上实验数据显示N-（间硝基苯磺酰）-6-甲基吲哚是一个安全有效的抗 HIV-1 候选化合物，具有进一步研究价值。