浦肯野细胞退化小鼠分子机制的初步研究

浦肯野细胞退化小鼠的主要特征是在出生后15到18天的时候浦肯野细胞开始退化，到出生后30天几乎所有的浦肯野细胞都己死亡。在22到24天左右pcd＿小鼠表现为中等程度的共济失调。同时在pcd小鼠中还伴随着视网膜光感受体细胞和嗅球僧帽细胞的缓慢退化。另外雄性的pcd小鼠精子发育异常。尽管已经发现该小鼠的表型特征是由ATP／GTPbindingprotein1（Agtpbp1）基因的突变引起的，但是引起浦肯野细胞退化的分子作用机制和途径仍然不是很清楚。在本研究中我们运用DNA微阵列技术对出生后20天的浦肯野细胞退化小鼠和野生型小鼠的基因表达谱进行了分析，处于该发育时期的pcd小鼠还没有表现出明显的表型异常现象。结果显示在野生型和突变型小鼠中有3的个表达水平显著不同的基因，其中大多数基因都与新陈代谢和细胞的生理过程相关。同时根据基因表达的方式将野生型和突变型小鼠分为两个不同的类型。我们用semi-quantitatiyeRT-PCR的方法验证了DNA微阵列的结果。在本实验中发现的基因将为我们今后的研究提供方向和分子目标。另一方面，为了探索可能引起浦肯野细胞退化小鼠表型的遗传途径，我们运用酵母双杂交的方法以AgtP如1基因的三个不同长度的片断为诱饵筛选小鼠脑的cDNA文库，试图找到与七切如湘互作用的蛋白。结果筛选到57个阳性克隆，其中22个是不同的cDNAs。共转化实验和信息学分析揭示6个蛋白可能与Agtpbp1发生相互作用。在57个阳性克隆中有15个经测序和共转化分析都属于同一个蛋白，即SNAP25-associatedproteins（Snapin）。它是神经递质释放过程中的一个功能蛋白。为了阐明pcd，J、鼠的突变机制我们需要进一步在哺乳动物中验证可能发生的蛋白相互作用和进行详尽的分析。