碱性成纤维细胞生长因子的克隆、表达、纯化、生物活性及与小分子的相互作用

人碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）是一种单链的具有与肝素结合能力的多肤分子，它能够调节内皮细胞及其它来源于中胚层和神经外胚层等多种细胞的生长、分化、迁移和凋亡，同时是一种重要的血管生成因子，因此具有广泛的临床应用价值。本论文就将具有多种生物学功能的碱性碱纤维细胞生长因子开发为基因工程药物所存在的一些基本问题，进行了大量细致的研究工作并获得一些具有新意的研究结果。应用现代基因工程技术分别在原核E.coli系统和真核Pichia pastoris系统件1克隆表达了人碱性碱纤维细胞生长因子，生物活性测定结果表明在毕赤酵母体系中表达的重组人碱性碱纤维细胞生长因子的活性高于E.coli中表达的bFGF的活性。筛选出高分泌型的Pichia pastoris工程菌，并建立了高效表达的方法；经过一步亲和层析既获得了电泳纯的bFGF其产量为100mg／L发酵液。SDS-PAGE电泳以及Western blOt实验都证明了其具有天然bFGF的性质，并用紫外、荧光光谱刘于毕赤酵母表达体系表达的重组人bFGF的三维结构进行了表征，用圆二色谱对其二级结构进行了表征，同时用质谱测定了其精确分子量为17931 Da．首次研究了不同价态的稀土离子与碱性碱纤维细胞生长因子相互作用引起bFGF不同的构象及活性变化，以及聚金属氧酸盐（POM）在低浓度能够刺激bFGF的活性，在高浓度抑制bFGF活性的现象。