长白山白眉蝮蛇蛇毒中酶类的纯化和表征

本论文系统研究了长白山白眉蝮蛇蛇毒中四种具有抗栓活性及可以作为基础理论研究的工具酶的分离纯化，并进行了扩大化试验，得到了可直接用于工业生产的分离工艺流程。并采用SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS－PAGE）、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI－TOFMS）等分析手段确认了这四种酶的纯度及分子量，共获得以下几种质谱纯和电泳纯的酶A_2，其分子量为14.0kDa；三种精氨酸酯酶（AEasel、 AEase2和AEase3），它们的分子量分别为29.9kDa、27.5kDa、和28.8kDa；L－氨基酸氧化酶，其分子量为92.8 kDa；以及纤溶酶，其分子量为23.3 kDa。并对几种酶的质谱行为进行了系统研究，考察了酶的浓度等因素对多聚体多电荷离子峰形成的影响，并给出了它们的形成机理。上述酶中，我们按其分子量的大小、亚基组成以及氨基酸残基数目与文献报道的已知的酶相比较，认为L－氨基酸氧化酶、磷脂酶A_2和精氨酸酯酶2(Aease2)和精氨酸酯酶3(AEase3)是酶的新的类型。系统研究了所获得的四种酶的金属离子的含量，指出了磷脂酶A_2和纤溶酶均为Ca~(2+)离子结合蛋白，Ca~(2+)离子是酶分子活性所必需的。精氨酸酯酶和L－氨基酸氧化酶则为含Zn~(2+)酶，每个酶分子中分别含有两个和四个Zn~(2+)离子，它们仅起到稳定蛇毒酶的高级结构的作用，去除后对活性影响不大，并考察了多种金属离子对酶的活性和荧光光谱的作用。本文系统研究了四种酶的荧光光谱，用同步荧光光谱法了解了酶分子中略氨酸和色氨酸残基的微环境；用荧光淬灭方法，研究了其淬灭作用及机理，并讨论了荧光基团所处的环境。另外，还系统表征了几种酶的物理化学性质、酶学性质，得到了许多有意义的结果。