一种简易的人艾滋病毒( HIV21) 载量测定方法的建立与初步评价

　目的:建立一种简易的HIV21 感染者和艾滋病人血浆病毒载量测定的方法。方法:构建含保守的引物SK145P SK431 扩增靶序列的重组质粒pSPgag737 ,重组质粒体外转录产物经系列稀释得到HIV21 定量测定的外参照,在同样条件下以 引物SK145PSK431 对外参照和待测样品进行RT2PCR 扩增,用电泳图谱分析系统分析经EB 染色的扩增产物电泳图谱,作出外 参照的初始加入拷贝数与光强度的标准曲线,获得相应的回归方程,进而计算出待测样品的HIV21 病毒载量。结果:重组质粒 pSPaga737 经酶切和PCR 鉴定,确认含有引物SK145PSK431 的扩增靶序列,用重组质粒体外转录,得到了1～105 copies 的10 倍系 列稀释的外参照,外参照标准曲线有较好的线性关系( r = 0196) 。该方法的测定范围为5 ×102～5 ×107 拷贝Pml 血浆。对10 个样品进行3 次重复测定,平均变异系数较小( CV = 20 %) 。结论:所建立的HTV21 病毒载量定量测定方法,操作简单,价格 便宜,特异性好,同时有较好的可重复性。

云南省与中国科学院省院合作项目资助(96S004)