AIDS 免疫治疗相关腺病毒载体的构建

艾滋病（AIDS）是人类免疫缺陷病毒（HIV）感染后引起的一种严重危害人类健 康的致死性传染病。抗HIV 药物挽救和延长了很多HIV 感染者的生命，提高了其生活 质量，但是仍然不能治愈AIDS 和预防传播。最终有效控制HIV 传播和感染的方法可能 仍将依赖于HIV 疫苗的应用。HIV 感染对感染者以及社会造成的灾难性后果使得发展 一个有效的艾滋病疫苗变得尤为紧迫和重要。 负载HIV-1 抗原的DC 回输到HIV-1 感染者体内可以诱导产生较强的抗HIV-1 细 胞免疫反应，这种免疫反应理论上和临床试验都表明治疗AIDS 有效，而且对HARRT 治疗能够产生很好的协同作用。我们拟用感染了重组腺病毒的DC，回输到HIV-1 感染 者体内，期望可以较好地控制病毒复制和阻止感染。为此，本研究我们制备了重组腺病 毒vAd-gp140、vAd-tat 和vAd-gp140-tat，为后续研究奠定基础。 结构蛋白Env 是激发抗体反应的抗原，由于Env 全长有较大细胞毒性，本文采用 了截短的gp140 分子，删除了gp41 的胞内段，降低了gp140 蛋白的细胞毒性。同时保 留了gp41 的跨膜区，表达的蛋白可被正确地锚定在细胞表面，提高蛋白的免疫原性。 将gp140 分子克隆到复制缺陷型的腺病毒载体中，用Wester Blotting 方法检测到gp140 在293 细胞中的表达。 有效的抗 HIV-1 的疫苗应该能够同时激发针对多种亚型病毒株的细胞和体液免疫 反应。早期病毒蛋白激发的CTL 应答在控制病毒载量上更为有效，而且Tat 蛋白的重 要免疫抗原表位和功能区域在不同HIV-1 病毒株之间是高度保守的。Tat 蛋白的多种生 物学功能使得它成为较强的免疫原、共抗原和佐剂，激发T 细胞抗原表位的Th1 型反 应和CTL 反应，扩大体内T 细胞识别的抗原表位谱，提高T 细胞特异性免疫反应。本 文扩增了HIV-1ⅢB 的tat 基因，克隆到复制缺陷性的腺病毒中，构建了重组腺病毒 vAd-tat，并在293 细胞中表达了分子量大小为15kDa 的蛋白。早期蛋白和结构蛋白的联合免疫能够全面地控制病毒复制，在动物实验中一定程度 上保护了猴子。我们将已得到表达的gp140 和tat 基因进行融合表达。利用融合PCR 技 术，扩增gp140 和tat 的融合基因，构建携有HIV-1 gp140-tat 融合基因的重组腺病毒 vAd-gp140-tat。gp140-tat 在293 细胞中的融合表达还需要进一步验证。 下一步的工作是将构建好的重组腺病毒感染DC，检测外源基因在DC 中的表达水 平，对DC 表面分子表型的影响以及对DC 功能的影响。