杂交水稻威优64及其亲本叶绿体D1蛋白基因psbA的分子克隆与结构比较研究

水稻是我国及东南亚广大地区的主要粮食作物之一。已发现由叶绿体基因组编码的某些多肽与光合效率之间存在着密切的联系。但是，根据我们所掌握的资料，直至目前为止，还没有见到从分子水平上阐明高光效植物与低光效植物之间相互关系的研究报导。 本工作主要从编码D1蛋白的psbA基因着手研究。D1蛋白是光系统Ⅱ反应中心的组成之一,它是均三氮苯类(triazine)除草剂的结合受体。 实验采用无水法从杂交水稻威优64及其亲本V20A和测64的幼苗叶片中提联并纯化各自的ctDNA，然后用限制性内切酶BamHI、EcoRI、Hind III、PstⅠ分别进行切割消化。Southern吸印杂交结果表明，在水稻ctDNA2.2Kb的EcoRI限制片段上，编码着psbA基因的全序列。据此，我们用2.0-2.5 Kb范围的ctDNA的EcoR I酶切片段和pBR322质粒载体进行重组，并转化到E. coli HB101菌株中，构成水稻叶绿体DNA专一性基因文库。用分子杂交方法分别从三种水稻品种的专一性基因文库中调到了各自的psbA基因，它们的重组体质粒分别定名为pWsbA, pVsbA和ZsbA并构建了这三个基因的核酸内切酶图谱。结果发现，在本实验体检测的若干种核酸内切酶切割位点分布上，这三个基因并无差异，但同已发表的双子叶植物（豆，烟草等）比较，则有明显的不同。