水母雪莲DFR基因的克隆及其正义和反义植物表达载体的构建


Autoria(s): 吕晓芬
Contribuinte(s)

赵德修

Data(s)

2007

Resumo

水母雪莲(Saussurea medusa Maxim.)为多年生菊科植物,是我国珍稀药用资源。所含的主要生物活性成分是黄酮类物质,具有抗炎、镇痛、免疫抑制及抗氧化等功效。但由于水母雪莲生长环境特殊,生长缓慢,人工引种困难;加上长期掠夺性采挖,造成其野生药用资源短缺,已经不能满足市场的需求。近年来,世界上掀起了植物药开发的热潮,植物药以其天然低毒的特点倍受关注,而黄酮类化合物更是以其广谱的药理作用引人瞩目。 黄酮类化合物的合成代谢途径在植物界进化过程中很保守,黄酮类生物合成途径中的相关酶也已得到确证并进行了系统的研究。二氢黄酮醇-4-还原酶(Dihydroflavonol-4-reductase, DFR)是一个处于花色素或者原花色素合成途径中的关键酶,它与黄酮合成途径中的黄酮醇合成酶(flavonol synthase)竞争底物。本研究以水母雪莲为研究对象,根据近缘物种DFR基因的保守核苷酸序列设计兼并引物,通过PCR技术,从已经建立的水母雪莲红色愈伤组织cDNA文库中筛选到一个编码该酶的cDNA序列,该序列全长1166个碱基对。根据生物信息学分析,此cDNA编码342个氨基酸;Blastp分析结果显示,该氨基酸序列与同科植物翠菊(Callistephus chinensis)的相似性最高,达87%;SWISSMODEL软件预测其蛋白的三级结构与葡萄(Vitis vinifera)的十分相似,活性中心的关键氨基酸残基也完全一致。据此可以断定,我们所得到的cDNA为编码二氢黄酮醇还原酶的基因,并命名为水母雪莲二氢黄酮醇还原酶基因(SmDFR)。为了得到SmDFR的DNA序列,我们又设计特异引物,从水母雪莲的基因组中扩增出了由1871个碱基对组成的DNA序列,该序列包含五个内含子和六个外显子。 为了提高水母雪莲和大苞雪莲中黄酮类物质的含量,我们构建了SmDFR的反义植物表达载体,利用根癌农杆菌介导进行基因转化。通过改变影响农杆菌转化的实验条件包括外植体来源、农杆菌菌株、细菌浓度、外植体预培养时间、侵染时间和乙酰丁香酮的浓度进行转基因试验,目前尚未得到转基因植株。另外,我们构建了SmDFR正义植物表达载体,通过对拟南芥(Arabidopsis thaliana) DFR基因突变体和矮牵牛(Petunia hybrida)进行基因转化,来验证SmDFR的功能;目前,此实验尚在进行之中。

Identificador

http://ir.ibcas.ac.cn/handle/151111/745

http://www.irgrid.ac.cn/handle/1471x/41277

Idioma(s)

ch

Fonte

吕晓芬.水母雪莲DFR基因的克隆及其正义和反义植物表达载体的构建.[中科院植物所硕士学位论文].2007.资料索取号:SS/:31/2007

Palavras-Chave #细胞生物学 #水母雪莲 #大苞雪莲 #黄酮 #二氢黄酮醇-4-还原酶 #Saussurea medusa #Saussurea involucrate #flavonoids #Dihydroflavonol -4-reductase
Tipo

学位论文