沙冬青抗冻组份的分离纯化和afp基因克隆的尝试

本文用三种方法分离纯化沙冬青（Ammopiptanthus mongolicus）叶片抗冻蛋白质。从70%硫酸铵沉淀后的上清液中得到了一种碱性的小分子物质，UiS，具有较高的溶解度( 260 mg/ml)和较强的降低溶液冰点的能力（200 mg/ml，冰点小于-20℃）：从10%硫酸铵和26%氯化铵共沉淀物中分离到一种抗冻蛋白-B3，B3分子量为39.8 kDa，热滞活性为0.45℃(10 mg/ml)：从沙冬青叶片热稳定蛋白质中用双向电泳一电泳回收法分离到afp,其分子量为40 kDa,pl为9.0。热滞活性为0.9℃(20 mg/ml)，和其他抗冻蛋白质进行比较，没有发现相同的类型。afp和uis在叶片含量都很高，可能是沙冬青抗冻生理过程中两种主要物质，它们对于沙冬青抵御-20℃左右的冷冻温度具有重要的意义。afp N端序列为SDDL SFTF NKFV PCQT DILF，据此合成了六段5’引物和一段3’引物，用RT - PCR方法从叶片中扩增出一段200 bp左右的片段。