冬小麦春化作用相关基因Verc203的功能鉴定

本文应用反义基因技术对减法杂交和差异筛选所获得的春化相关基因CDNA克隆( Verc203)的功能进行鉴定。将Vcrc203插入PB1221质粒的CaMV35S启动子与GLIS基因之间构成表达载体，采用花粉管途径转基因法导入冬小麦胚，得到300粒种子。将上述处理的冬小麦种子萌发后在2-4℃处理28天，转入自然条件下栽培。以幼叶为材料提取基因组DNA，以Gus基因片断为探针，用点杂交法筛选获得转基因植株．转基因植株在自然条件下生长三个月未见抽穗， 而同样栽培条件下的对照（未经转基因处理的冬小麦，经相同条件春化处理）则全部抽穗。以Vcrc203和Gus基因的部分序列为引物，在转基因材料的基因组DNA中扩增出Vcrc203反义基因序列，Gus活性检测表明Gus基因在转基因小麦的茎尖和叶片中得到表达。上述结果表明Vcrc203的反义基因已整合到冬小麦基因组内，并得到高效表达。转基因植株的发育受到严重影响，显示Vcrc203基因可能参与了冬小麦春化作用对植物发育进程的调控．