10KD Zein 基因克隆、序列分析以及对植物百脉根（Lotus corniculatus L.）转化

本文应用聚合酶链式反应技术(PCR)在体外从玉米基因组中扩增富于含硫氨基酸的10KD玉米醇溶蛋白基因、克隆及序列分析结果，并用该基因转化豆科牧草百脉根以期获得有良好营养平衡的转基因牧草，从玉米无菌苗提取大片段的DNA．根据目的基因两端的DNA顺序合成一对引物，利用PCR技术经30个活环DNA扩增，得到了一特异的0.57Kb片段，克隆后对该片段进行限制性内切酶物理图谱分析并测定了其全部编码区序列．结果表明，克隆到的完整的10 Kd玉米醇溶蛋白基因编码区与国外报道的相比，其核苷酸顺序及推测的氧基酸序列同源率分别为96%和90%．将基因分别置于质粒pKYLX5及pKYLX71表达戴体，构建了分别在rbcS及CaMV 35S启动子调控下的10 KD zein基因的嵌合质粒．列用农杆菌介导的叶盘法及茎切段法，选用百脉根( Lotus corniculatus)品种一名分别为“里澳”及“马库”，以5-10天的无菌苗子叶和茎切段为外植体，进行基因转化，在含50mg／L km的MS培养基上，2-3周获得抗性的芽，将芽转到无激素的MS培养基上诱导生根，获得抗性植株，捡测工作正在进行中。