苜蓿核基因组文库的构建及豆血红蛋白基因的分离

苜蓿（Medicago Sativa L）是在共生固氮研究中常用的豆科植物之一。为了研究共生固氮的机理，尤其是对宿主植物豆血红蛋白基因和其它结瘤素基因的结构、表达和调控进行探讨。我们以λ系列噬菌体EMBL4作载体，用苜蓿核DNA10-20Kb片段作供体，构建了苜宿核基因组文库，共得到8.75×105pfu重组噬菌体，达到了建库的容量。用EcoR I对10个随机选择的重组子DNA进行酶切检查，证明其插入片段大小分布在10-22Kb之间，与预期的相同。用苜蓿豆血红蛋白CDNA作探针，经三轮噬菌斑原位杂交和点杂交，成功地从基因文库中分离出四个含豆血红蛋白基因同源顺序的重组噬菌体克隆。对其中之一用EcoR I Bgl II、 Hind III作了酶谱分析。