Asymmetrical flow field-flow fractionation in the study of water-soluble macromolecules


Autoria(s): Yohannes, Gebrenegus
Contribuinte(s)

Helsingin yliopisto, matemaattis-luonnontieteellinen tiedekunta, kemian laitos

Helsingfors universitet, matematisk-naturvetenskapliga fakulteten, kemiska institutionen

University of Helsinki, Faculty of Science, Department of Chemistry, Laboratory of Analytical Chemistry

Data(s)

26/10/2007

Resumo

Asymmetrical flow field-flow fractionation (AsFlFFF) was constructed, and its applicability to industrial, biochemical, and pharmaceutical applications was studied. The effect of several parameters, such as pH, ionic strength, temperature and the reactants mixing ratios on the particle sizes, molar masses, and the formation of aggregates of macromolecules was determined by AsFlFFF. In the case of industrial application AsFlFFF proved to be a valuable tool in the characterization of the hydrodynamic particle sizes, molar masses and phase transition behavior of various poly(N-isopropylacrylamide) (PNIPAM) polymers as a function of viscosity and phase transition temperatures. The effect of sodium chloride salt and the molar ratio of cationic and anionic polyelectrolytes on the hydrodynamic particle sizes of poly (methacryloxyethyl trimethylammonium chloride) and poly (ethylene oxide)-block-poly (sodium methacrylate) and their complexes were studied. The particle sizes of PNIPAM polymers, and polyelectrolyte complexes measured by AsFlFFF were in agreement with those obtained by dynamic light scattering. The molar masses of PNIPAM polymers obtained by AsFlFFF and size exclusion chromatography agreed also well. In addition, AsFlFFF proved to be a practical technique in thermo responsive behavior studies of polymers at temperatures up to about 50 oC. The suitability of AsFlFFF for biological, biomedical, and pharmaceutical applications was proved, upon studying the lipid-protein/peptide interactions, and the stability of liposomes at different temperatures. AsFlFFF was applied to the studies on the hydrophobic and electrostatic interactions between cytochrome c (a basic peripheral protein) and anionic lipid, and oleic acid, and sodium dodecyl sulphate surfactant. A miniaturized AsFlFFF constructed in this study was exploited in the elucidation of the effect of copper (II), pH, ionic strength, and vortexing on the particle sizes of low-density lipoproteins.

Väitöstyössä valmistettiin asymmetrinen virtauskenttävirtausfraktiointi(AsFlFFF)laitteisto ja tutkittiin sen soveltuvuutta teollisten, biokemiallisten ja farmaseuttisten näytteiden analysointiin. Laitteistolla tutkittiin useiden muuttujien kuten pH:n, ionivahvuuden, lämpötilan ja reaktanttien sekoitussuhteen vaikutusta tutkittavan näytteen hiukkaskokoon, moolimassaan sekä aggregaatioon. Teollisten näytteiden kohdalla AsFlFFF osoittautui tehokkaaksi työkaluksi poly(N-isopropyyliakryyliamidin) (PNIPAM) hydrodynaamisen hiukkaskoon, moolimassan sekä faasinmuutoskäyttäytymisen määrityksessä, kun ajoliuoksen viskositeettia ja lämpötilaa vaihdeltiin. Tutkittiin myös natriumkloridin sekä eri moolisuhteissa lisättyjen kationisten ja anionisten polyelektrolyyttien vaikutusta poly(metakryloetyylitrimetyyliammoniumkloridin) ja poly(natriummetakrylaatti) - poly(etyleenioksidi) -blokkikopolymeerin sekä näiden välisten kompleksien hydrodynaamiseen hiukkaskokoon. AsFlFFF:llä PNIPAM- polymeerinäytteille saadut hiukkaskoot eivät poikenneet vastaavista dynaamisella valonsironnalla saaduista tuloksista. Suuria eroja ei havaittu myöskään AsFlFFF:llä ja kokoekskluusiokromatografialla PNIPAM-näytteille määritetyissä moolimassoissa. AsFlFFF osoittautui käytännölliseksi tekniikaksi lämpöherkkien polymeerien tutkimuksessa toimittaessa alle 50 oC lämpötiloissa. AsFlFFF:n käyttökelpoisuus biologisiin, biolääketieteellisiin ja farmaseuttisiin sovelluksiin osoitettiin tutkimalla lipidi-proteiini/peptidi vuorovaikutuksia ja liposomien stabiilisuutta eri lämpötiloissa. Menetelmällä tutkittiin anionisen lipidin, oleiinihapon sekä natriumdodekyylisulfaatin ja sytosomi-C:n välillä ilmeneviä hydrodynaamisia ja sähköstaattisia vuorovaikutuksia. Työn yhteydessä rakennettua miniatyrisoitua AsFlFFF-kanavaa käytettiin tutkittaessa kupari(II):n, ionivahvuuden sekä pyörresekoituksen (vortexing) alhaisen tiheyden lipoproteiinin (LDL) partikkelikokoon aiheuttamia muutoksia.

Identificador

URN:ISBN:978-952-10-4179-2

http://hdl.handle.net/10138/21022

Idioma(s)

en

Publicador

Helsingin yliopisto

Helsingfors universitet

University of Helsinki

Relação

URN:ISBN:978-952-92-2628-3

Helsinki: Helsinki University Printing House, 2007

Direitos

Julkaisu on tekijänoikeussäännösten alainen. Teosta voi lukea ja tulostaa henkilökohtaista käyttöä varten. Käyttö kaupallisiin tarkoituksiin on kielletty.

This publication is copyrighted. You may download, display and print it for Your own personal use. Commercial use is prohibited.

Publikationen är skyddad av upphovsrätten. Den får läsas och skrivas ut för personligt bruk. Användning i kommersiellt syfte är förbjuden.

Palavras-Chave #analyyttinen kemia
Tipo

Väitöskirja (artikkeli)

Doctoral dissertation (article-based)

Doktorsavhandling (sammanläggning)

Text