The function of Bmps and Runx2 in normal tooth development and in the pathogenesis of cleidocranial dysplasia


Autoria(s): Åberg, Thomas
Contribuinte(s)

Helsingin yliopisto, lääketieteellinen tiedekunta, hammaslääketieteen laitos

University of Helsinki, Faculty of Medicine, Institute of Dentistry, Department of Orthodontics

Helsingfors universitet, medicinska fakulteten, institutionen för odontologi

Developmental Biology Research Programme, Institute of Biotechnology

Department of Oral and Maxillofacial Diseases, University of Helsinki Central Hospital

Viikki Graduate School in Biosciences, University of Helsinki

Data(s)

24/11/2006

Resumo

The development of many embryonic organs is regulated by reciprocal and sequential epithelial-mesenchymal interactions. These interactions are mediated by conserved signaling pathways that are reiteratively used. Cleidocranial dysplasia (CCD) is a congenital syndrome where both bone and tooth development is affected. The syndrome is characterized by short stature, abnormal clavicles, general bone dysplasia, and supernumerary teeth. CCD is caused by mutations in RUNX2, a transcription factor that is a key regulator of osteoblast differentiation and bone formation. The first aim of this study was to analyse the expression of a family of key signal molecules, Bone morphogenetic protein (Bmp) at different stages of tooth development. Bmps have a variety of functions and they were originally discovered as signals inducing ectopic bone formation. We performed a comparative in situ hybridisation analysis of the mRNA expression of Bmp2-7 from initiation of tooth development to differentiation of dental hard tissues. The expression patterns indicated that the Bmps signal between the epithelial and mesenchymal tissues during initiation and morphogenesis of tooth development, as well as during the differentiation of odontoblasts and ameloblasts. Furthermore, they are also part of the signalling networks whereby the enamel knot regulates the patterning of tooth cusps. The second aim was to study the role of Runx2 during tooth development and thereby to gain better understanding of the pathogenesis of the tooth phenotype in CCD. We analysed the tooth phenotype of Runx2 knockout mice and examined the patterns and regulation of Runx2 gene expression.. The teeth of wild-type and Runx2 mutant mice were compared by several methods including in situ hybridisation, tissue culture, bead implantation experiments, and epithelial-mesenchymal recombination studies. Phenotypic analysis of Runx2 -/- mutant tooth development showed that teeth failed to advance beyond the bud stage. Runx2 expression was restricted to dental mesenchyme between the bud and early bell stages of tooth development and it was regulated by epithelial signals, in particular Fgfs. We searched for downstream targets of Runx2 by comparative in situ hybridisation analysis. The expression of Fgf3 was downregulated in the mesenchyme of Runx2 -/- teeth. Shh expression was absent from the enamel knot in the lower molars of Runx2 -/- and reduced in the upper molars. In conclusion, these studies showed that Runx2 regulates key epithelial-mesenchymal interactions that control advancing tooth morphogenesis and histodifferentiation of the epithelial enamel organ. In addition, in the upper molars of Runx2 mutants extra buddings occured at the palatal side of the tooth bud. We suggest that Runx2 acts as an inhibitor of successional tooth formation by preventing advancing development of the buds. Accordingly, we propose that RUNX2 haploinsuffiency in humans causes incomplete inhibition of successional tooth formation and as a result supernumerary teeth.

Sikiön ulkopintaa verhoavasta ektodermistä ja sen alaisesta mesenkyymistä kehittyy useita elimiä, joiden kehityksellä on paljon yhteisiä piirteitä. Ektodermaalisten elinten, kuten hampaiden ja rauhasten, solutyypit ja kehityksen anatomia on varsin samankaltaista kaikilla nisäkkäillä. Näiden elinten kehitystä säätelevät epiteelin ja mesenkyymin vuorovaikutukset, joihin osallistuvat yleisten viestiperheiden molekyylit. Pään ja kasvojen luut muodostuvat hermostopienasta peräisin olevasta ektomesenkyymistä. Niiden kehitys tapahtuu ns. välittömän luutumisen mekanismilla eli intramembranoottisesti, kun muut luut muodostuvat rustoisen välivaiheen kautta eli endokondraalisesti. Hampaille ja luille on yhteistä mineralisoituneen kovakudoksen muodostus. Viestimolekyylejä koodaavien geenien mutaatiot aiheuttavat lukuisia kehityshäiriöitä hampaissa ja pään alueen luissa. Kleidokraniaalinen dysplasia on oireyhtymä, jossa on muutoksia sekä luissa että hampaissa. Oireyhtymään liittyy häiriintynyt pituuskasvu, yleinen luiden poikkeavuus, solisluiden epämuodostumat ja ylilukuiset hampaat. Kleidokraniaalisen dysplasian aiheuttaa mutaatio RUNX2 geenissä, joka on välttämätön luusolujen erilaistumiselle. Väitöskirjatyön ensimmäinen tavoite oli tutkia luun morfogeenisten kasvutekijöiden (Bmp) funktiota hampaan kehityksessä. Bmp:t löydettiin alunperin niiden luuta indusoivan kyvyn perusteella, mutta niillä on lisäksi lukuisia funktioita eri elinten kehityksessä. Bmp2, -3, -4, -5, -6, ja -7 geenien ilmentyminen paikannettiin kehittyvissä hiiren hampaissa. Tulokset viittaavat siihen, että Bmp:t välittävät epiteelin ja mesenkyymin välisiä vuorovaikutuksia sekä hampaan kehityksen alkuvaiheissa että hampaan kovakudoksia muodostavien solujen erilaistumisen aikana. Lisäksi Bmp:t ovat osana hampaan signaalikeskuksen, kiillekyhmyn, signaaliverkostossa, joka säätelee hampaan kaavoittumisen. Toinen tavoite oli tutkia Runx2 geenin funktiota hampaan kehityksessä ja siten myös paremmin ymmärtää kleidokraniaalisen dysplasian patogeneesi ja molekyläärinen tausta. Ensin tutkittiin Runx2 geenin ilmentymistä hampaan kehityksen aikana ja todettiin, että ilmentyminen rajautuu hampaan mesenkyymiin silmuvaiheesta varhaiseen kellovaiheeseen. Lisäksi tutkittiin Runx2 poistogeenisten hiirten hampaiden kehitystä ja todettiin, että kehitys pysähtyy silmuvaiheseen. Runx2:n säätelemiä geenejä etsittiin vertailemalla viestiverkostojen geenien ilmenemistä Runx2 poistogeenisella ja normaalilla hiirellä hampaiden kehityksen aikana . Runx2 poistogeenisen hiiren hampaissa todettiin fibroblastikasvutekijäperheeseen kuuluvan Fgf3:n ilmentymisen olevan hyvin alhainen ja lisäksi Shh geenin ilmentymisen puuttuvan alamolaareissa ja vähentyneen ylämolaareista. Tulokset osoittivat, että Runx2 säätelee epiteelin ja mesenkyymin välisiä vuorovaikutuksia, jotka ohjaavat hampaan varhaista kehitystä. Lisäksi havaitsimme ylimääräisiä silmuja Runx2 poistogeenisen hiiren ylämolaareissa ja esitimme että Runx2 estää ylilukuisten hampaiden muodostumista. Tähän viittaa myös se, että yhden Runx2 alleelin puuttuminen kleidokraanialista dysplasiaa sairastavilla potilailla aiheuttaa ylilukuisia hampaita.

Identificador

URN:ISBN:952-10-3522-6

http://hdl.handle.net/10138/20281

Idioma(s)

en

Publicador

Helsingin yliopisto

University of Helsinki

Helsingfors universitet

Relação

Yliopistopaino: Helsingin Yliopisto, 2006, Dissertationes bioscientiarum molecularium Universitatis Helsingiensis in Viikki. 1795-7079

URN:ISBN:952-10-3521-8

URN:ISSN:1795-7079

Direitos

Julkaisu on tekijänoikeussäännösten alainen. Teosta voi lukea ja tulostaa henkilökohtaista käyttöä varten. Käyttö kaupallisiin tarkoituksiin on kielletty.

This publication is copyrighted. You may download, display and print it for Your own personal use. Commercial use is prohibited.

Publikationen är skyddad av upphovsrätten. Den får läsas och skrivas ut för personligt bruk. Användning i kommersiellt syfte är förbjuden.

Palavras-Chave #hammaslääketiede
Tipo

Väitöskirja (artikkeli)

Doctoral dissertation (article-based)

Doktorsavhandling (sammanläggning)

Text