Systematic investigation of oxygen and growth factors in clinically valid ex vivo expansion of cord blood CD34+ hematopoietic progenitor cells

Background aims. Cord blood is considered to be a superior source of hematopoietic stem and progenitor cells for transplantation, but clinical use is limited primarily because of the low numbers of cells harvested. Ex vivo expansion has the potential to provide a safe, effective means of increasing cell numbers. However, an absence of consensus regarding optimum expansion conditions prevents standard implementation. Many studies lack clinical applicability, or have failed to investigate the combinational effects of different parameters.

Methods. This is the first study to characterize systematically the effect of growth factor combinations across multiple oxygen levels on the ex vivo expansion of cord blood CD34 hematopoietic cells utilizing clinically approvable reagents and methodologies throughout.

Results. Optimal fold expansion, as assessed both phenotypically and functionally, was greatest with thrombopoietin, stem cell factor, Flt-3 ligand and interleukin-6 at an oxygen level of 10%. With these conditions, serial expansion showed continual target population expansion and consistently higher expression levels of self-renewal associated genes.

Conclusions. This study has identified optimized fold expansion conditions, with the potential for direct clinical translation to increase transplantable cell dose and as a baseline methodology against which future factors can be tested.

Quantificação de subpopulações linfocitárias no sangue do cordão umbilical de eqüinos

Este estudo visou a determinar os valores eritroleucométricos e quantificar as subpopulações linfocitárias no sangue do cordão umbilical (SCU) e no sangue jugular de eqüinos neonatos. Foi realizada a colheita de SCU e do sangue jugular de 20 potros ao nascimento. As amostras foram submetidas às determinações dos valores eritroleucométricos e à quantificação de subpopulações de linfócitos-T, pela técnica citofluorométrica. Não foram verificadas diferenças significativas (P<0,05) entre os valores médios de tais parâmetros, entre o sangue jugular de neonatos e o SCU eqüino. O valor total para neutrófilos segmentados, no SCU e na jugular dos neonatos, foi inferior ao reportado para eqüinos ao nascimento. As contagens de linfócitos CD5+ e CD4+ no SCU e jugular de neonatos eqüinos foram inferiores àquelas admitidas para o sangue periférico de eqüinos adultos, indicando um componente imunológico imaturo. No entanto, a contagem de linfócitos CD8+ foi semelhante à descrita em sangue periférico de eqüinos adultos. A proporção CD4:CD8 obtida nesse ensaio, tanto para o SCU (2,64±0,91), como no sangue jugular de eqüinos neonatos (2,41±0,81), demonstrou uma dominância das células T CD4+ sobre os linfócitos T CD8+.

Estudo eritroleucométrico e proteinograma sérico do sangue do cordão umbilical e jugular de eqüinos ao nascimento e de suas respectivas mães

Colheram-se amostras de sangue do cordão umbilical (SCU) e do sangue circulante de cinco eqüinos neonatos, imediatamente após o nascimento, e o sangue da própria mãe, utilizando-se um sistema a vácuo. O material foi submetido à contagem global de hemácias e leucócitos e à determinação do volume globular e da concentração de hemoglobina; à contagem diferencial de leucócitos em esfregaços sangüíneos; e ao cálculo dos índices eritrocitométricos. Foram realizadas a dosagem de proteínas séricas totais e a eletroforese das proteínas séricas em gel de agarose. Não houve diferenças significativas entre os parâmetros do SCU e do sangue da jugular dos potros. No SCU dos potros observaram-se valores mais elevados para contagem global de hemácias (9,75x10(6)/µl), dosagem de hemoglobina (14,65g/dl) e concentração de hemoglobina corpuscular média (37,23g/dl); e valores menores para volume corpuscular médio (40,50fl), proteína total (4,37g/dl), alfa-globulinas (0,65g/dl), beta-globulinas (1,10g/dl), gama-globulinas (0g/dl) e contagens global (5,40 x 10³/µl) e diferencial de leucócitos, exceto contagem de neutrófilos bastonetes e monócitos, quando comparados com os valores obtidos no sangue de suas mães.

Quantificação de células CD34+ do sangue do cordão umbilical de cães

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Influência do tipo de parto na hematologia do cordão umbilical de cães

O sangue do cordão umbilical humano tem sido crescentemente utilizado como fonte de células-tronco. Os modelos experimentais de células-tronco da medula óssea, em cães, têm propiciado informações importantes para transplantes medulares em humanos. Vários trabalhos citam a influência do tipo de parto nas características do sangue do cordão umbilical (SCU) humano. Entretanto, não existem relatos sobre a colheita do sangue do cordão umbilical de cães. O objetivo deste ensaio é avaliar a influência do tipo de parto na hematologia do cordão umbilical de cães. No presente protocolo experimental, foram estudados 54 fetos de cães, ao final da vida intra-uterina, provenientes de parto normal (n=24) e cesariana (n=30). A colheita de sangue do cordão umbilical foi realizada com seringa de cinco mL contendo solução anticoagulante EDTA (1mg/1mL sangue). em seguida, a contagem global de hemácias, leucócitos, plaquetas, a determinação da concentração de hemoglobina, taxa de hematócrito, os índices eritrocitários foram realizados no contador automático de células. A contagem diferencial de leucócitos foi determinada em esfregaços de SCU corados com May-Grunwald-Giemsa (MGG). Com relação ao eritrograma e ao plaquetograma, não houve diferença significativa entre as amostras obtidas em cesarianas e partos normais. Os valores do leucograma do SCU colhido em partos normais foram superiores àqueles obtidos em cesarianas (P<0,05). Portanto, o tipo de parto influencia os valores hematológicos do cordão umbilical de cães.

The placenta as a barrier for toxic and essential elements in paired maternal and cord blood samples of South African delivering women

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Blood galactose and glucose levels in mothers, cord blood, and 48-hour-old breast-fed full-term infants

Background: Although galactose is an important component in human lactose, there are few reports of its role in the newborn metabolism. Objective: To determine the relationship of blood galactose and glucose levels in mothers, cord blood, and breast-fed full-term newborn infants. Methods: Maternal and cord vein blood samples were obtained from 27 pregnant women at delivery, and from their breastfed, full-term newborns 48 h later. Galactose and glucose were determined by HPLC. Statistical analysis used ANOVA and Pearson correlation with p < 0.05. Results: Maternal galactose concentrations (0.08 +/- 0.03 mmol/l) were similar to cord blood galactose (0.07 +/- 0.03 mmol/l; p = 0.129). However, newborn blood galactose (0.05 +/- 0.02 mmol/l) was significantly lower than both cord (p = 0.042) and maternal blood (p = 0.002). Maternal blood glucose levels (4.72 +/- 0.86 mmol/l) were higher than cord blood (3.98 +/- 0.57 mmol/l; p < 0.001), and cord blood concentrations were higher than newborn blood levels (3.00 +/- 0.56 mmol/l; p < 0.001); all values expressed as mean +/- SD. Significant correlation was only seen between maternal and cord blood galactose levels (r = 0.67; p < 0.001) and glucose levels (r = 0.38; p = 0.047). Conclusion: the association and similarity between maternal and cord blood galactose levels suggest that the fetus is dependent on maternal galactose. In contrast, the lower galactose levels in newborn infants and a lack of association between both suggest self-regulation and a dependence on galactose ingestion. Copyright (c) 2007 S. Karger AG, Basel.

Bancos de sangue de cordão umbilical e placentário para uso familiar, de caráter privado, no Brasil: subsídios técnicos, legais e éticos para uma análise de implementação

Os bancos de sangue de cordão umbilical e placentário foram criados a partir da comprovação de que o sangue de cordão umbilical e placentário (SCUP) é uma fonte rica em células progenitoras hematopoéticas (CPH) e alternativa às células provenientes da medula óssea para transplante, fato que gerou o interesse pelo armazenamento das células nele contidas. A legislação brasileira distingue bancos para uso alogênico não aparentado (públicos) e para uso exclusivamente autólogo (privados). Por sua vez, o armazenamento de SCUP para uso familiar (doação dirigida) pode ser realizado em bancos de sangue de cordão umbilical e placentário públicos, serviços de hemoterapia ou centros de transplante, quando há um membro da família do nascituro com doença diagnosticada e que necessite de transplante de CPH como tratamento. Apesar de a legislação ser clara, a Anvisa tem identificado o interesse sobre a possibilidade da liberação de unidades de SCUP, armazenadas em bancos autólogos, para a utilização de outrem, familiar, além do recém-nascido beneficiário. O objetivo do trabalho visa promover a reflexão sobre uma possível modificação dos parâmetros legais nacionais que regem os bancos de SCUP autólogo, tornando-os bancos com vistas ao uso familiar, por meio da exposição dos principais elementos relacionados ao tema. O estudo analisou os critérios técnico-sanitários legais para regulamentação dos bancos; descreveu as características das CPH de diversas fontes e tipos de doação para transplante; contextualizou a relação com os princípios da Bioética; avanços sobre terapia e pesquisas relativas às CPH; e discutiu possíveis riscos envolvidos no processo.

Isolation and characterization of Wharton's jelly-derived multipotent mesenchymal stromal cells obtained from bovine umbilical cord and maintained in a defined serum-free three-dimensional system

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Avaliação do perfil de expressão gênica de células CD34+ e células CD CD133+ isoladas de medula óssea e de sangue de cordão umbilical

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Estudo eritroleucométrico e proteinograma do sangue do cordão umbilical e da jugular de eqüinos e asininos ao nascimento e de suas respectivas mães

Pós-graduação em Cirurgia Veterinária - FCAV

Imunofenotipagem de subpopulações de linfócitos-T no sangue do cordão umbilical de eqüinos

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Padronização da coleta e quantificação de células-tronco hematopoéticas no sangue do cordão umbilical de cães

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)